Μέθοδοι και βήματα εντοπισμού σφαλμάτων για μικροσκοπία αντίθεσης φάσης
ένα. Με βάση τη ρύθμιση του συστήματος φωτισμού Kuhler, χρησιμοποιήστε τη μέθοδο φωτεινού πεδίου για να εστιάσετε καθαρά το δείγμα.
σι. Γυρίστε τον προβολέα στο Ph1 και ευθυγραμμίστε τον με τη γραμμή κλίμακας στο πικάπ. Επιλέξτε ένα αντικείμενο αντίθεσης φάσης 10 x και αντικαταστήστε το με το διαφανές δείγμα που θα παρατηρήσετε.
ντο. Αφαιρέστε έναν από τους προσοφθάλμιους φακούς, αντικαταστήστε τον με ένα τηλεσκόπιο κεντραρίσματος και εστιάστε στους δύο δακτυλίους αντίθεσης στο οπτικό πεδίο (ο μαύρος δακτύλιος αντίθεσης του αντικειμενικού φακού και ο δακτύλιος αντίθεσης μετάδοσης του φακού συμπυκνωτή).
ρε. Οι δύο δακτύλιοι διαφοράς στο οπτικό πεδίο μπορεί να μην συμπίπτουν απαραίτητα. Ρυθμίστε τις δύο συσκευές ρύθμισης στον προβολέα (ρυθμίζοντας την αριστερή και τη δεξιά θέση των δακτυλίων διαφοράς με ράβδους ρύθμισης και πόμολα τύπου τριβής για τη ρύθμιση της μπροστινής και πίσω θέσης), έτσι ώστε ο διαφανής δακτύλιος να κινείται εμπρός και πίσω για να συμπίπτει με τον μαύρο δακτύλιο ;
μι. Μετά τη ρύθμιση, επιστρέψτε στον προσοφθάλμιο φακό παρατήρησης και πιέστε το πράσινο φίλτρο στην οπτική διαδρομή για να παρατηρήσετε την εικόνα διαφοράς φάσης του δείγματος.
φά. Όταν παρατηρείτε με αντικειμενικούς φακούς 20 x και 40 x, ο προβολέας πρέπει να ρυθμίζεται στη θέση Ph2 και όταν χρησιμοποιείτε αντικειμενικό φακό 100 x, ο προβολέας πρέπει να ρυθμίζεται στη θέση Ph3.
Πεδίο εφαρμογής: Κατάλληλο για παρατήρηση διαφανών, μη χρωματισμένων ή μη χρωματισμένων δειγμάτων, όπως διάφορα κύτταρα, ζωντανοί ιστοί, μη χρωματισμένες ή μη χρωματισμένες φέτες ιστού, υδρόβιοι οργανισμοί κ.λπ.
Η βασική αρχή του μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης
Όταν το φως διέρχεται από ένα σχετικά διαφανές δείγμα, δεν υπάρχει σημαντική αλλαγή στο μήκος κύματος (χρώμα) και το πλάτος (φωτεινότητα) του φωτός. Επομένως, κατά την παρατήρηση μη χρωματισμένων δειγμάτων (όπως ζωντανά κύτταρα) κάτω από ένα κανονικό οπτικό μικροσκόπιο, η μορφολογία και η εσωτερική τους δομή είναι συχνά δύσκολο να διακριθούν. Ωστόσο, λόγω των διαφορών στον δείκτη διάθλασης και στο πάχος των διαφορετικών τμημάτων της κυψέλης, θα υπάρχουν διαφορές στην οπτική διαδρομή του άμεσου και του περιθλαμένου φωτός κατά τη διέλευση από αυτό το δείγμα. Καθώς η οπτική διαδρομή αυξάνεται ή μειώνεται, η φάση των επιταχυνόμενων ή καθυστερημένων κυμάτων φωτός θα αλλάξει (με αποτέλεσμα τη διαφορά φάσης). Η διαφορά φάσης του φωτός δεν μπορεί να γίνει αισθητή με γυμνό μάτι, αλλά το μικροσκόπιο διαφοράς φάσης μπορεί να χρησιμοποιήσει την ειδική συσκευή του - ένα κυκλικό άνοιγμα και μια πλάκα φάσης, και να χρησιμοποιήσει το φαινόμενο παρεμβολής του φωτός για να μετατρέψει τη διαφορά φάσης του φωτός σε διαφορά πλάτους (διαφορά φωτός και σκοταδιού) που μπορεί να ανιχνευθεί από το ανθρώπινο μάτι. Αυτό κάνει το αρχικά διαφανές αντικείμενο να εμφανίζει εμφανείς διαφορές φωτός και σκοταδιού, ενισχύει την αντίθεση και μας επιτρέπει να παρατηρούμε καθαρά ζωντανά κύτταρα και ορισμένες λεπτές δομές μέσα στα κύτταρα που δεν μπορούν να φανούν ή να φαίνονται καθαρά με συνηθισμένα οπτικά μικροσκόπια και μικροσκόπια σκοτεινού πεδίου.
Η αρχή απεικόνισης ενός μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης: Η οπτική πηγή μπορεί να περάσει μόνο μέσω ενός διαφανούς δακτυλίου κυκλικού ανοίγματος, το οποίο στη συνέχεια εστιάζεται σε μια δέσμη φωτός. Όταν αυτή η δέσμη φωτός διέρχεται από το αντικείμενο που ελέγχεται, υφίσταται διάφορους βαθμούς απόκλισης (διάθλασης) λόγω των διαφορετικών οπτικών διαδρομών κάθε τμήματος. Λόγω του γεγονότος ότι η εικόνα που σχηματίζεται από τον διαφανή δακτύλιο συμπίπτει με τη συζευγμένη επιφάνεια στην πλάκα φάσης και το εστιακό επίπεδο πίσω από τον αντικειμενικό φακό. Επομένως, το άμεσο φως που δεν έχει αποκλίνει διέρχεται από τη συζευγμένη επιφάνεια, ενώ το περιθλαμένο φως που έχει αποκλίνει περνά από την επιφάνεια αντιστάθμισης. Λόγω των διαφορετικών ιδιοτήτων της συζυγούς επιφάνειας και της επιφάνειας αντιστάθμισης στην πλάκα φάσης, θα δημιουργήσουν αντίστοιχα μια ορισμένη διαφορά φάσης και μείωση της έντασης του φωτός που διέρχεται από αυτά τα δύο μέρη. Στη συνέχεια, τα δύο σύνολα φωτός θα συγκλίνουν μέσω του πίσω φακού και θα ταξιδέψουν στην ίδια οπτική διαδρομή, προκαλώντας παρεμβολές μεταξύ του άμεσου και του περιθλαμένου φωτός, αλλάζοντας τη διαφορά φάσης σε διαφορά πλάτους. Με αυτόν τον τρόπο, κατά τη μικροσκοπία αντίθεσης φάσης, η διαφορά φάσης που δεν μπορεί να διακριθεί από το ανθρώπινο μάτι μετατρέπεται σε διαφορά πλάτους (διαφορά φωτεινότητας) που μπορεί να διακριθεί από το ανθρώπινο μάτι μέσω του φωτός ενός άχρωμου διαφανούς σώματος.
