Βελτιωμένα πλεονεκτήματα της πολυφωτονικής μικροσκοπίας σάρωσης με λέιζερ
Η πολυφωτονική μικροσκοπία σάρωσης με λέιζερ είναι μια σημαντική βελτίωση της οπτικής μικροσκοπίας, κυρίως για την παρατήρηση της βαθιάς δομής των ζωντανών κυττάρων, των σταθερών κυττάρων και των ιστών, και μπορεί να αποκτήσει σαφείς και ευκρινείς δομές Z-επίπεδου πολλαπλών στρωμάτων, δηλαδή οπτικές τομές και μπορεί να κατασκευάσει Η τρισδιάστατη συμπαγής δομή του δείγματος. Το ομοεστιακό μικροσκόπιο χρησιμοποιεί μια πηγή φωτός λέιζερ, η οποία επεκτείνεται για να γεμίσει ολόκληρο το πίσω εστιακό επίπεδο του αντικειμενικού φακού και στη συνέχεια συγκλίνει σε ένα πολύ μικρό σημείο στο εστιακό επίπεδο του δείγματος μέσω του συστήματος φακών του αντικειμενικού φακού. Ανάλογα με το αριθμητικό διάφραγμα του αντικειμενικού φακού, η διάμετρος του φωτεινότερου σημείου φωτισμού είναι περίπου 0.25 ~ 0.8 μm και το βάθος είναι περίπου 0.5 ~ 1,5 μm. Το μέγεθος του ομοεστιακού σημείου εξαρτάται από το σχεδιασμό του μικροσκοπίου, το μήκος κύματος του λέιζερ, τα χαρακτηριστικά του αντικειμενικού φακού, τη ρύθμιση κατάστασης της μονάδας σάρωσης και τη φύση του δείγματος. Τα μικροσκόπια πεδίου έχουν μεγάλο εύρος φωτισμού και μεγάλο βάθος φωτισμού, ενώ τα ομοεστιακά μικροσκόπια έχουν φωτισμό που συγκεντρώνεται σε ένα εστιακό σημείο στο εστιακό επίπεδο. Το πιο βασικό πλεονέκτημα της ομοεστιακής μικροσκοπίας είναι ότι μπορεί να εκτελέσει λεπτή οπτική τομή παχύρρευστων φθοριζόντων δειγμάτων (έως 5{12}} μm ή περισσότερο), με πάχος περίπου 0,5 έως 1,5 μm. Μια σειρά εικόνων οπτικής τομής μπορεί να ληφθεί μετακινώντας το δείγμα πάνω-κάτω με τον βηματικό κινητήρα του άξονα Z του μικροσκοπίου. Η λήψη πληροφοριών εικόνας ελέγχεται εντός του επιπέδου και δεν θα παρεμποδίζεται από σήματα από άλλες θέσεις στο δείγμα. Μετά την αφαίρεση της επίδρασης του φθορισμού φόντου και την αύξηση της αναλογίας σήματος προς θόρυβο, η αντίθεση και η ανάλυση των ομοεστιακών εικόνων βελτιώνονται σημαντικά σε σύγκριση με τις παραδοσιακές εικόνες φθορισμού φωτισμού πεδίου. Σε πολλά δείγματα, πολλά περίπλοκα δομικά στοιχεία συμπλέκονται για να σχηματίσουν πολύπλοκα συστήματα, αλλά μόλις συλλεχθούν αρκετά οπτικά τμήματα, μπορούμε να τα ανακατασκευάσουμε τρισδιάστατα μέσω λογισμικού. Αυτή η πειραματική προσέγγιση έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στη βιολογική έρευνα για την αποσαφήνιση των πολύπλοκων δομικών και λειτουργικών σχέσεων μεταξύ κυττάρων ή ιστών.
