Μικροβιολογικό μικροσκόπιο απευθείας μέτρηση
Πειραματική αρχή
Η απευθείας μέτρηση κάτω από ένα μικροσκόπιο με χρήση αιμοκυτταρόμετρου είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος μέτρησης μικροβίων. Το πλεονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι ότι είναι διαισθητική και γρήγορη. Τοποθετήστε το κατάλληλα αραιωμένο βακτηριακό εναιώρημα (ή εναιώρημα σπορίων) στον θάλαμο μέτρησης μεταξύ της αντικειμενοφόρου πλάκας και της γυάλινης επιφάνειας του αιμοκυτταρόμετρου και μετρήστε στο μικροσκόπιο. Εφόσον ο όγκος του θαλάμου μέτρησης είναι σταθερός (0,1 mm2), μπορεί να μετατραπεί στον συνολικό αριθμό μικροοργανισμών ανά μονάδα όγκου σύμφωνα με τον αριθμό των μικροοργανισμών που παρατηρούνται στο μικροσκόπιο. Επειδή αυτή η μέθοδος μετράει το άθροισμα των ζωντανών και των νεκρών βακτηρίων, ονομάζεται επίσης μέθοδος ολικής καταμέτρησης βακτηρίων.
Ένα αιμοκυτταρόμετρο είναι συνήθως μια ειδική γυάλινη πλάκα πάνω στην οποία τέσσερις αυλακώσεις σχηματίζουν τρεις πλατφόρμες. Η πλατφόρμα στη μέση χωρίζεται σε δύο μισά με μια μικρή οριζόντια αυλάκωση. Ένα πλέγμα είναι χαραγμένο στην πλατφόρμα σε κάθε πλευρά. Κάθε πλέγμα χωρίζεται σε εννέα μεγάλα τετράγωνα. Το μεγάλο τετράγωνο στη μέση είναι η αίθουσα μέτρησης. Οι μικροοργανισμοί μετρώνται στον θάλαμο μέτρησης.
Η κλίμακα της αίθουσας μέτρησης έχει γενικά δύο προδιαγραφές, η μία είναι ότι ένα μεγάλο τετράγωνο χωρίζεται σε 16 μεσαία τετράγωνα και κάθε μεσαίο τετράγωνο χωρίζεται σε 25 μικρά τετράγωνα (Εικόνα Ⅷ-2). το άλλο είναι ένα μεγάλο τετράγωνο Το τετράγωνο χωρίζεται σε 25 μεσαία τετράγωνα και κάθε μεσαίο τετράγωνο χωρίζεται σε 16 μικρά τετράγωνα (Εικόνα Ⅷ-1, Γ). Αλλά ανεξάρτητα από το είδος του πίνακα μέτρησης, ο αριθμός των μικρών τετραγώνων σε κάθε μεγάλο τετράγωνο είναι ο ίδιος, δηλαδή 16×25=400 μικρά τετράγωνα.
Το μήκος της πλευράς κάθε μεγάλου τετραγώνου είναι 1 mm και το εμβαδόν κάθε μεγάλου τετραγώνου είναι 1 mm2. Αφού καλυφθεί το γυαλί καλύμματος, το ύψος μεταξύ του γυαλιού ολίσθησης και του γυαλιού καλύμματος είναι 0,1 mm, επομένως ο όγκος του θαλάμου μέτρησης είναι 0,1 mm3.
Κατά τη μέτρηση, συνήθως μετράτε τον συνολικό αριθμό βακτηρίων στα πέντε μεσαία τετράγωνα, λαμβάνετε τη μέση τιμή κάθε μεσαίου τετραγώνου και, στη συνέχεια, πολλαπλασιάστε με το 16 ή το 25 για να λάβετε τον συνολικό αριθμό βακτηρίων σε ένα μεγάλο τετράγωνο και στη συνέχεια μετατρέψτε το συνολικός αριθμός βακτηρίων σε 1 ml βακτηριακού διαλύματος.
Εξοπλισμός εργαστηρίου
Αιμοκυτταρόμετρο, μικροσκόπιο, καλυπτρίδα, αποστειρωμένο τριχοειδές.
Πειραματικά Υλικά
Εναιώρημα Saccharomyces cerevisiae
Πειραματική διαδικασία (μέθοδος άμεσης μέτρησης μικροσκοπικού μικροσκοπίου)
1. αραίωση
Αραιώστε σωστά το εναιώρημα Saccharomyces cerevisiae. Εάν το βακτηριακό διάλυμα δεν είναι παχύρρευστο, δεν χρειάζεται να αραιωθεί.
2. Μικροσκοπική αίθουσα μέτρησης
Πριν προσθέσετε δείγματα, πραγματοποιήστε μια μικροσκοπική επιθεώρηση του θαλάμου μέτρησης της πλάκας μέτρησης. Εάν υπάρχει βρωμιά, πρέπει να καθαριστεί πριν την καταμέτρηση.
3. προσθέστε δείγμα
Καλύψτε την καθαρή και στεγνή πλάκα του αιμοκυτταρομέτρου με ένα γυαλί καλύμματος και, στη συνέχεια, χρησιμοποιήστε ένα αποστειρωμένο σταγονόμετρο με στενό στόμα για να ρίξετε μια μικρή σταγόνα του αραιωμένου διαλύματος Saccharomyces cerevisiae από την άκρη του γυαλιού καλύμματος (όχι πολύ), έτσι ώστε το διάλυμα των βακτηρίων είναι κοντά στο κενό κατά μήκος του κενού. Η τριχοειδική όσμωση εισέρχεται στον θάλαμο μέτρησης από μόνη της και ο γενικός θάλαμος μέτρησης μπορεί να γεμίσει με βακτηριακό υγρό. Προσέξτε να μην υπάρχουν φυσαλίδες αέρα.
4. μέτρηση μικροσκοπίου
Αφού ξεκουραστείτε για 5 λεπτά, τοποθετήστε το αιμοκυτταρόμετρο στη σκηνή του μικροσκοπίου, χρησιμοποιήστε πρώτα έναν φακό χαμηλής ισχύος για να βρείτε τη θέση του θαλάμου μέτρησης και μετά μεταβείτε σε φακό υψηλής ισχύος για μέτρηση. Εάν διαπιστωθεί ότι το βακτηριακό διάλυμα είναι πολύ παχύ ή πολύ λεπτό πριν από την καταμέτρηση, είναι απαραίτητο να ρυθμιστεί εκ νέου η αραίωση πριν από την καταμέτρηση. Η γενική αραίωση του δείγματος απαιτεί περίπου
5-10 κελιά είναι κατάλληλα. Κάθε θάλαμος μέτρησης επιλέγει τα βακτήρια σε 5 μεσαία πλέγματα (προαιρετικά 4 γωνίες και κεντρικά πλέγματα) για μέτρηση. Τα βακτήρια στη γραμμή του πλέγματος υπολογίζονται γενικά μόνο στην επάνω και δεξιά γραμμή. Σε περίπτωση εκβλάστησης ζύμης, όταν το μέγεθος του σώματος του μπουμπουκιού φτάσει στο μισό του μητρικού κυττάρου, μετρήστε δύο βακτήρια. Μετρήστε ένα δείγμα για να υπολογίσετε την περιεκτικότητα σε βακτήρια του δείγματος από τις τιμές που μετρήθηκαν στους δύο θαλάμους μέτρησης.
5. Καθαρισμός του αιμοκυτταρόμετρου
Μετά τη χρήση, ξεπλύνετε την πλάκα μέτρησης αιμοσφαιρίων στη βρύση με πίδακες νερού, μην την πλένετε με σκληρά αντικείμενα και στεγνώστε την μόνοι σας ή με πιστολάκι μαλλιών μετά το πλύσιμο. Μικροσκοπική εξέταση, παρατηρήστε εάν υπάρχουν υπολειμματικά βακτήρια ή άλλα ιζήματα σε κάθε κύτταρο. Εάν δεν είναι καθαρό, πρέπει να πλυθεί επανειλημμένα μέχρι να είναι καθαρό.
