Βιομικροσκόπηση σε σχέση με τον όγκο των μπλοκ ιστών
Βιολογική μικροσκοπία Μέχρι στιγμής, η κρύα στερέωση, η κατεψυγμένη υπερλεπτή τομή και η λυοφιλίωση είναι μέθοδοι ρουτίνας για μικροτομές ακτίνων Χ ιστών και κυττάρων. Οι λεπτομέρειες αυτής της μεθόδου εξηγούνται ως εξής:
Για βιολογικά μικροσκόπια με συμπυκνωτή, ο συμπυκνωτής μπορεί να μετακινηθεί πάνω και κάτω για να γίνει μέτρια η φωτεινότητα και το διάφραγμα του μεταβλητού φωτός μπορεί επίσης να αλλάξει για να επιτευχθεί μέτρια φωτεινότητα 9b. Εάν το φως είναι ηλιόλουστο, ο συμπυκνωτής μπορεί να ανυψωθεί κατάλληλα και το διάφραγμα της μεταβλητής πηγής φωτός μπορεί να μεγεθυνθεί κατάλληλα. Εάν το φως είναι πολύ δυνατό, ο φακός του συμπυκνωτή μπορεί να χαμηλώσει κατάλληλα και το διάφραγμα του διασταυρούμενου φωτός μπορεί να μειωθεί κατάλληλα. Εάν εξακολουθείτε να αισθάνεστε εκθαμβωτικοί σε αυτήν την περίπτωση, μπορείτε να επιλέξετε ένα κατάλληλο φίλτρο και να το τοποθετήσετε στο στήριγμα κάτω από τον συμπυκνωτή. Αυτή η βελανιδιά θα μπορέσει να αποκτήσει τη φωτεινότητα που σας ικανοποιεί. Φυσικά, η ρύθμιση της επάνω και της κάτω θέσης του συμπυκνωτή, η προσαρμογή του μεγέθους του διαφράγματος της μεταβλητής οπτικής ένδειξης και η επιλογή ενός κατάλληλου φίλτρου απαιτούν μια συγκεκριμένη περίοδο εξάσκησης για να αποκτήσετε εμπειρία.
Ένα πολύ σημαντικό ζήτημα στη βιολογική μικροσκοπία είναι ότι στη διαδικασία δειγματοληψίας και διαχωρισμού των κυττάρων, μετά την λυοφιλοποίηση και την ενσωμάτωση ρητίνης (FD), μετά την κατάψυξη εξαιρετικά λεπτών αδρανών και μετά την ξήρανση με ψύξη, η περιεκτικότητα σε 65 στοιχεία σε κάθε μέρος πρέπει να αντιμετωπίζονται προσεκτικά. Τα προς ανάλυση κύτταρα δεν μπορούν να καταστραφούν. Γιατί η μικροανάλυση με ακτίνες Χ όχι μόνο περιλαμβάνει πολλά βήματα, αλλά κοστίζει και πολύ. Εάν τα κύτταρα που αναλύθηκαν είναι κατεστραμμένα κύτταρα ή νεκρά κύτταρα μετά από μεγάλο χρονικό διάστημα και επεξεργασία πολλαπλών σταδίων, είναι πολύ λυπηρό να εξαχθούν λάθος συμπεράσματα. Για παράδειγμα, τα καρδιομυοκύτταρα που διαχωρίζονται με θεραπεία με κολλαγενάση έχουν δύο σχήματα, το ένα είναι σε σχήμα μακράς ράβδου και το άλλο είναι στρογγυλό. Τα τελευταία είναι κύτταρα που πεθαίνουν και έχουν υποστεί βλάβη κατά την απομόνωση των κυττάρων.
Βιομικροσκόπηση Η ποσότητα και η κατανομή των ηλεκτρολυτών σε αυτούς τους δύο τύπους κυψελών είναι αρκετά διαφορετική. Το Na είναι πολύ υψηλό και το K είναι πολύ χαμηλό στα κυκλικά καρδιομυοκύτταρα και η συγκέντρωση ca στα νηματώδη είναι πολύ υψηλή. Μετά από έλεγχο με άλλες μεθόδους ανάλυσης, αποδείχθηκε ότι το υψηλό Na και το χαμηλό K των στρογγυλών κυττάρων και το υψηλό Ca στα μιτοχόνδρια οφείλονται στη βλάβη της κυτταρικής μεμβράνης κατά τη διαδικασία διαχωρισμού των κυττάρων. Η μέθοδος παγωμένης στερέωσης κυττάρων και ιστών είναι συνήθως η υιοθέτηση σβέσης και στερέωσης πρώτα και στη συνέχεια η αποθήκευση τους σε υγρό άζωτο. Η σταθεροποίηση απόσβεσης είναι πολύ σημαντική για το αποτέλεσμα της συντήρησης. Τα ζωντανά κύτταρα ή οι φρέσκοι ιστοί είναι πλούσιοι σε νερό. Κατά την απόσβεση, τα μέρη των κυττάρων ή των ιστών που βρίσκονται σε άμεση επαφή με το θρυμματισμένο ψυκτικό μέσο (ειδικά κατά την απόσβεση με υγρό άζωτο) συχνά καταψύχονται και στερεώνονται πρώτα, σχηματίζοντας έτσι ένα «κέλυφος», το οποίο εμποδίζει τα κεντρικά μέρη των κυττάρων να θρυμματισμένο και εν ψυχρώ. Ως εκ τούτου, όταν κάνουμε ανάλυση μικροπεριοχών X-line, συχνά διαπιστώνεται ότι υπάρχουν κρύσταλλοι πάγου στο κέντρο μεγαλύτερων κυττάρων. Για να αποφευχθεί αυτό, χρησιμοποιείται ως σπασμένο ψυκτικό μια ουσία με σημείο τήξης υψηλότερο από αυτό του υγρού αζώτου αλλά χαμηλότερο από αυτό του 806c. Υπάρχουν πολλές τέτοιες ουσίες, αλλά η φθηνότερη είναι το συμπυκνωμένο προπάνιο (σημείο βρασμού - 42.120c, σημείο τήξης - 187.10c, μοριακό βάρος 44,1) και η ταχύτητα ψύξης είναι η ταχύτερη. Το μειονέκτημά του όμως είναι ότι είναι εύφλεκτο.
Το βιολογικό μικροσκόπιο μπορεί να τοποθετήσει τη μυϊκή ίνα σε ένα ειδικό ράφι, έτσι ώστε όταν η συστολή της μυϊκής ίνας φτάσει σε μια ορισμένη φάση και πρέπει να διορθωθεί, ξεκινήστε αμέσως το ακροφύσιο για να ψεκάσει υγρό προπάνιο στη μυϊκή ίνα για να σβήσει και να τη διορθώσει. Στη συνέχεια αφαιρέθηκαν οι μυϊκές ίνες μαζί με το πλαίσιο και μπήκαν σε υγρό άζωτο. Εάν σταθεροποιήσετε αιμοσφαίρια ή απομονωμένα κύτταρα, συγκεντρώστε πρώτα τα κύτταρα με φυγοκέντρηση σε χαμηλή ταχύτητα, μεταφέρετε τα κύτταρα σε ένα ασημένιο φιαλίδιο με καλή θερμική αγωγιμότητα, τοποθετήστε το φιαλίδιο σε υγρό προπάνιο και καταψύξτε για στερέωση. Κατά τη στερέωση του παγκρέατος του αρουραίου στο εργαστήριο Hall, τα δύο τεμάχια χάλυβα προψύχθηκαν με υγρό ήλιο (ή υγρό άζωτο) και τα δύο χάλκινα τεμάχια συσφίχθηκε με λαβίδα και τοποθετήθηκαν στο μπροστινό και πίσω μέρος του παγκρέατος για να σβήσουν και να στερεωθούν. το πάγκρεας. Οι ιστοί ή τα κύτταρα μπορούν να αποθηκευτούν σε υγρό άζωτο για μακροχρόνια αποθήκευση μετά την απόσβεση και στερέωση.
Βιολογική μικροσκοπία Εκτός από την πιο σεβαστή μέθοδο κατεψυγμένης υπερλεπτής τομής, εδώ είναι μια άλλη τεχνική εναπόθεσης που χρησιμοποιούν οι επιστήμονες. Μια ουσία προστίθεται για να σχηματίσει ένα ίζημα με το προς ανάλυση συστατικό για να ακινητοποιηθεί πριν από την ανάλυση, και το ίζημα στη συνέχεια αναλύεται. Για παράδειγμα, οι άνθρωποι χρησιμοποιούν συχνά οξαλικό και πυροαντιμονικό για να εναποθέσουν ca στα μυϊκά κύτταρα. Το πρώτο δεν είναι αρκετά ευαίσθητο στη χαμηλή συγκέντρωση Ca στο κυτταρόπλασμα. Το πυροαντιμονικό είναι πιο ευαίσθητο και μπορεί να σχηματίσει εναποθέσεις πυκνότητας ηλεκτρονίων με ελεύθερο Ca στον εγκέφαλο, αλλά το πυροαντιμονικό δεν είναι συμβατό με το νάτριο, το μαγγάνιο, το βάριο, τον σίδηρο Σχηματίζονται επίσης αποθέσεις και είναι λιγότερο ειδικές. Η διαδικασία προετοιμασίας του δείγματος είναι παρόμοια με την προετοιμασία δειγμάτων υπερλεπτής τομής συνηθισμένου ηλεκτρονικού μικροσκοπίου μετάδοσης, η διαφορά είναι ότι 3 τοις εκατό πυροαντιμονικό κάλιο (αλατόνερο φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος, pH 7,6) σταθεροποιήθηκε για 6 ώρες πριν από τη στερέωση και στους λεκιασμένους μυς, εξαιρετικά λεπτές τομές. Μαύρες εναποθέσεις παρατηρήθηκαν στις μεσαίες γραμμές των ζωνών Α και 2 κάθε σαρκομερίου και χρησιμοποιήθηκαν μη χρωματισμένες τομές για μικροανάλυση ακτίνων Χ. Η τετραϋδροχλωρική διαμινοβενζιδίνη (DAB) χρησιμοποιήθηκε για την καθίζηση ουσιών που περιέχουν αίμη και ούτω καθεξής. Ο συνδυασμός αντίδρασης ιστοχημικής καθίζησης και γέφυρας μικροδιαφοροποίησης ακτίνων Χ μπορεί να εξεταστεί σε εργαστήρια που δεν έχουν συνθήκες παγωμένης υπερλεπτής τομής. Η ημιποσοτική μπορεί να γίνει σύμφωνα με το ύψος κορυφής των προς ανάλυση στοιχείων
