Προσδιορισμός του αριθμού των μικροοργανισμών - μικροσκοπική μέθοδος άμεσης μέτρησης!
Θεμελιώδης
Η μικροσκοπική μέθοδος άμεσης μέτρησης είναι μια απλή, γρήγορη και διαισθητική μέθοδος τοποθέτησης μιας μικρής ποσότητας του εναιωρήματος του δείγματος που πρόκειται να δοκιμαστεί σε μια ειδική γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα (επίσης γνωστή ως μετρητής βακτηρίων) με καθορισμένο εμβαδόν και όγκο και μέτρηση απευθείας κάτω από ένα μικροσκόπιο. Επί του παρόντος, οι μετρητές βακτηρίων που χρησιμοποιούνται συνήθως στο εσωτερικό και στο εξωτερικό περιλαμβάνουν: πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων, μετρητή βακτηρίων Peteroff-Hauser και μετρητή βακτηρίων Hawksley, κ.λπ. Μπορούν όλα να χρησιμοποιηθούν για τη μέτρηση εναιωρημάτων όπως ζυμομύκητες, βακτήρια και σπόρια μούχλας και οι βασικές αρχές είναι οι ίδιες. Οι δύο τελευταίοι μετρητές βακτηρίων έχουν συνολικό όγκο 0.02 mm3 αφού καλυφθούν με γυαλί κάλυψης και η απόσταση μεταξύ του γυαλιού καλύμματος και της αντικειμενοφόρου πλάκας είναι μόνο 0,02 mm, επομένως μικρά κελιά όπως π.χ. Τα βακτήρια μπορούν να παρατηρηθούν και να μετρηθούν με έναν αντικειμενικό φακό εμβάπτισης λαδιού. Εκτός από τη χρήση αυτών των μετρητών βακτηρίων, υπάρχει επίσης μια μέθοδος εκτίμησης για την άμεση παρατήρηση της αναλογίας της περιοχής επιχρίσματος προς την περιοχή του οπτικού πεδίου κάτω από ένα μικροσκόπιο. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται γενικά για τη βακτηριολογική εξέταση του γάλακτος. Το πλεονέκτημα της μεθόδου άμεσης μέτρησης μικροσκοπίου είναι ότι είναι διαισθητική, γρήγορη και εύκολη στη χρήση. Όμως το μειονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι ότι τα μετρούμενα αποτελέσματα είναι συνήθως το άθροισμα νεκρών και ζωντανών βακτηρίων. Προς το παρόν, υπάρχουν ορισμένες μέθοδοι για να ξεπεραστεί αυτό το μειονέκτημα, όπως ο συνδυασμός ζωντανών βακτηρίων που χρωματίζουν την καλλιέργεια μικροθαλάμου (σύντομο χρονικό διάστημα) και την προσθήκη αναστολέων κυτταρικής διαίρεσης για να επιτευχθεί ο σκοπός της μέτρησης μόνο ζώντων βακτηρίων.
Σε αυτό το πείραμα, χρησιμοποιήθηκε ένα αιμοκυτταρόμετρο ως παράδειγμα για την εκτέλεση απευθείας μέτρησης κάτω από ένα μικροσκόπιο. Για τις μεθόδους χρήσης των άλλων δύο μετρητών βακτηρίων, ανατρέξτε στις οδηγίες κάθε κατασκευαστή. Η απευθείας μέτρηση κάτω από ένα μικροσκόπιο με αιμοκυτταρόμετρο είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος μικροβιακής μέτρησης. Ο πίνακας μέτρησης είναι μια ειδικά κατασκευασμένη γυάλινη τσουλήθρα, στην οποία τέσσερις υποδοχές σχηματίζουν τρεις πλατφόρμες. η ευρύτερη πλατφόρμα στη μέση χωρίζεται σε δύο μισά με μια μικρή οριζόντια σχισμή και κάθε πλευρά της πλατφόρμας είναι επενδεδυμένη με ένα πλέγμα. Κάθε πλέγμα χωρίζεται σε εννέα μεγάλα τετράγωνα και το μεσαίο μεγάλο τετράγωνο είναι ο θάλαμος μέτρησης. Η κλίμακα της αίθουσας μέτρησης έχει γενικά δύο προδιαγραφές, η μία είναι ότι ένα μεγάλο τετράγωνο χωρίζεται σε 25 μεσαία τετράγωνα και κάθε μεσαίο τετράγωνο χωρίζεται σε 16 μικρά τετράγωνα. το άλλο είναι ότι ένα μεγάλο τετράγωνο χωρίζεται σε 16 μεσαία τετράγωνα και κάθε μεσαίο τετράγωνο χωρίζεται σε 25 μικρά τετράγωνα, αλλά ανεξάρτητα από το είδος του πίνακα μέτρησης, υπάρχουν 400 μικρά τετράγωνα κάθε μεγάλο τετράγωνο. Το μήκος της πλευράς κάθε μεγάλου τετραγώνου είναι 1 mm και, στη συνέχεια, το εμβαδόν κάθε μεγάλου τετραγώνου είναι 1 mm 2. Αφού καλυφθεί το γυαλί καλύμματος, το ύψος μεταξύ του γυαλιού καλύμματος και του γυαλιού ολίσθησης είναι 0,1 mm, οπότε ο όγκος του ο θάλαμος μέτρησης είναι 0,1 mm (ένα δέκατο χιλιοστό του χιλιοστόλιτρου).
