Προσδιορισμός του αριθμού των μικροοργανισμών-Μικροσκοπική μέθοδος άμεσης μέτρησης!
Η αύξηση του βακτηριακού πληθυσμού εκδηλώνεται με αύξηση του αριθμού των κυττάρων ή αύξηση του κυτταρικού υλικού. Οι μέθοδοι για τον προσδιορισμό του αριθμού των κυττάρων περιλαμβάνουν την άμεση μικροσκοπική μέτρηση, τον αριθμό των πλακών, την εκτίμηση θολότητας με φασματοφωτόμετρο, τον πιο πιθανό αριθμό MPN και τη διήθηση μεμβράνης. (διήθηση μεμβράνης) κ.λπ. Οι μέθοδοι για τη μέτρηση των κυτταρικών ουσιών περιλαμβάνουν τον προσδιορισμό του ξηρού βάρους των κυττάρων, τον προσδιορισμό ορισμένων κυτταρικών συστατικών όπως η περιεκτικότητα σε άζωτο, η περιεκτικότητα σε RNA και DNA και ο προσδιορισμός των προϊόντων μεταβολιτών. Εν ολίγοις, υπάρχουν πολλές μέθοδοι για τη μέτρηση της μικροβιακής ανάπτυξης, η καθεμία με τα δικά της πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα. Η μέθοδος πρέπει να επιλέγεται σύμφωνα με τις συγκεκριμένες απαιτήσεις της εργασίας. Αυτό το πείραμα εισάγει κυρίως τη μέθοδο άμεσης μέτρησης μικροσκοπίου που χρησιμοποιείται συνήθως στην παραγωγή και την επιστημονική έρευνα.
1. Απαιτήσεις σκοπού
1. Αποσαφηνίστε την αρχή της μέτρησης με έναν πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων.
2. Κατακτήστε τη μέθοδο μέτρησης μικροοργανισμών χρησιμοποιώντας πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων.
2. Βασικές αρχές
Η μέθοδος άμεσης μέτρησης μικροσκοπίου είναι μια απλή, γρήγορη και διαισθητική μέθοδος που τοποθετεί μια μικρή ποσότητα αιωρήματος του προς δοκιμή δείγματος σε μια ειδική αντικειμενοφόρο πλάκα με καθορισμένη περιοχή και όγκο (ονομάζεται επίσης βακτηριόμετρο) και την μετράει απευθείας κάτω από ένα μικροσκόπιο. Μέθοδοι. Επί του παρόντος, τα βακτηριόμετρα που χρησιμοποιούνται συνήθως στο εσωτερικό και στο εξωτερικό περιλαμβάνουν: αιμοκυτταρόμετρο, βακτηριόμετρο Peteroff-Hauser και βακτηριόμετρο Hawksley κ.λπ. Όλα μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη μέτρηση ζυμομυκήτων, βακτηρίων, σπορίων μούχλας και άλλων εναιωρημάτων και οι βασικές αρχές είναι οι ίδιες. Οι δύο τελευταίοι μετρητές βακτηρίων έχουν συνολικό όγκο 0.02 mm3 αφού καλυφθούν με γυαλί κάλυψης και η απόσταση μεταξύ του γυαλιού καλύμματος και της αντικειμενοφόρου πλάκας είναι μόνο 0,02 mm. Επομένως, ένας αντικειμενικός φακός εμβάπτισης λαδιού μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την παρατήρηση και την ανίχνευση μικρότερων κυττάρων όπως τα βακτήρια. μετρώ. Εκτός από τη χρήση αυτών των βακτηριομέτρων, υπάρχει επίσης μια μέθοδος εκτίμησης που παρατηρεί απευθείας την αναλογία της περιοχής επιχρίσματος προς την περιοχή του οπτικού πεδίου στο μικροσκόπιο. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιείται γενικά για τη βακτηριολογική εξέταση του γάλακτος. Τα πλεονεκτήματα της μεθόδου άμεσης μέτρησης μικροσκοπίου είναι ότι είναι διαισθητική, γρήγορη και εύκολη στη χρήση. Ωστόσο, το μειονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι ότι το μετρούμενο αποτέλεσμα είναι συνήθως το άθροισμα νεκρών βακτηρίων και ζωντανών βακτηρίων. Υπάρχουν επί του παρόντος ορισμένες μέθοδοι για να ξεπεραστεί αυτό το μειονέκτημα, όπως ο συνδυασμός βιώσιμων βακτηρίων που χρωματίζουν την καλλιέργεια μικροθαλάμου (σύντομο χρονικό διάστημα) και την προσθήκη αναστολέων κυτταρικής διαίρεσης για να επιτευχθεί ο σκοπός της μέτρησης μόνο βιώσιμων βακτηρίων.
Αυτό το πείραμα χρησιμοποιεί ένα αιμοκυτταρόμετρο ως παράδειγμα για τη διεξαγωγή απευθείας μέτρησης κάτω από ένα μικροσκόπιο. Για τη χρήση των άλλων δύο βακτηριομέτρων, ανατρέξτε στις οδηγίες κάθε κατασκευαστή. Η απευθείας μέτρηση κάτω από ένα μικροσκόπιο με χρήση αιμοκυτταρόμετρου είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος μικροβιακής απαρίθμησης. Ο πίνακας μέτρησης είναι μια ειδική διαφάνεια με τέσσερις αυλακώσεις που σχηματίζουν τρεις πλατφόρμες. η ευρύτερη πλατφόρμα στη μέση χωρίζεται σε δύο μισά με μια μικρή οριζόντια αυλάκωση και υπάρχει ένα πλέγμα σε κάθε πλευρά της πλατφόρμας. Κάθε τετράγωνο πλέγμα χωρίζεται σε εννέα μεγάλα τετράγωνα και το μεγάλο τετράγωνο στη μέση είναι η αίθουσα μέτρησης. Η δομή του πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων φαίνεται στο σχήμα {{0}}. Υπάρχουν γενικά δύο προδιαγραφές για την κλίμακα του θαλάμου μέτρησης. Το ένα είναι ένα μεγάλο τετράγωνο χωρισμένο σε 25 μεσαία τετράγωνα και κάθε μεσαίο τετράγωνο χωρίζεται σε 16 μικρά τετράγωνα (Εικόνα 15-2). το άλλο είναι μια μεγάλη πλατεία. Το τετράγωνο πλέγμα χωρίζεται σε 16 μεσαία τετράγωνα και κάθε μεσαίο τετράγωνο χωρίζεται σε 25 μικρά τετράγωνα. Ωστόσο, ανεξάρτητα από το είδος του πίνακα μέτρησης, υπάρχουν 400 μικρά τετράγωνα σε κάθε μεγάλο τετράγωνο. Το μήκος της πλευράς κάθε μεγάλου τετραγώνου είναι lmm, τότε το εμβαδόν κάθε μεγάλου τετραγώνου είναι lmm2. Αφού καλυφθεί η ολίσθηση κάλυψης, το ύψος μεταξύ της ολίσθησης κάλυψης και της ολίσθησης είναι 0,lmm, επομένως ο όγκος του θαλάμου μέτρησης είναι 0,lmm3 (ένα δέκατο χιλιοστό του χιλιοστόλιτρου). Εικόνα 15-1 Δομή του πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων (1) Εικόνα 15-2 Δομή του πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων (2) A. Μπροστινή όψη. Β. Διαμήκης τομή. Μεγαλωμένο τετράγωνο πλέγμα, το μεγάλο τετράγωνο στη μέση είναι ο θάλαμος μέτρησης 1. Πίνακας μέτρησης αιμοσφαιρίων. 2. Κάλυμμα καλύμματος. 3. Όταν μετράτε στο θάλαμο μέτρησης, συνήθως μετράτε τον συνολικό αριθμό βακτηρίων σε πέντε τετράγωνα, μετά βρείτε τη μέση τιμή κάθε τετραγώνου και, στη συνέχεια, πολλαπλασιάστε με το 25 ή το 16 για να λάβετε Ο συνολικός αριθμός βακτηρίων σε ένα μεγάλο τετράγωνο μετατρέπεται. στον συνολικό αριθμό βακτηρίων σε 1 ml βακτηριακού διαλύματος. Ας υποθέσουμε ότι ο συνολικός αριθμός βακτηρίων στα πέντε μεσαία τετράγωνα είναι Α και ο συντελεστής αραίωσης του βακτηριακού διαλύματος είναι Β. Εάν πρόκειται για πλάκα μέτρησης με 25 μεσαία τετράγωνα, τότε ο συνολικός αριθμός βακτηρίων σε 1 mL του βακτηριακού διαλύματος {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (κομμάτια) Με τον ίδιο τρόπο, εάν πρόκειται για πλάκα μέτρησης με 16 τετράγωνα, ο συνολικός αριθμός βακτηρίων σε 1 mL βακτηριακού διαλύματος {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (κομμάτια),
