Διαφορές μεταξύ μικροσκοπίας φθορισμού και ομοεστιακής μικροσκοπίας
μικροσκόπιο φθορισμού
1. Το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιεί υπεριώδη φως ως πηγή φωτός για να ακτινοβολήσει το αντικείμενο που επιθεωρείται, προκαλώντας την εκπομπή φθορισμού και στη συνέχεια να παρατηρήσει το σχήμα και τη θέση του αντικειμένου κάτω από το μικροσκόπιο. Η μικροσκοπία φθορισμού χρησιμοποιείται για τη μελέτη της απορρόφησης, της μεταφοράς, της διανομής και του εντοπισμού των ουσιών εντός των κυττάρων. Ορισμένες ουσίες στα κύτταρα, όπως η χλωροφύλλη, μπορούν να φθορίζουν όταν εκτίθενται σε υπεριώδη ακτινοβολία. Υπάρχουν επίσης κάποιες ουσίες που δεν μπορούν να εκπέμψουν οι ίδιοι το φθορισμό, αλλά μπορούν επίσης να εκπέμπουν φθορισμό εάν χρωματίζονται με φθορίζουσες βαφές ή φθορίζοντα αντισώματα και ακτινοβολούνται με υπεριώδες φως. Η μικροσκοπία φθορισμού είναι ένα από τα εργαλεία ποιοτικής και ποσοτικής έρευνας σε τέτοιες ουσίες.
2. Αρχή του μικροσκοπίου φθορισμού:
(Α) Πηγή φωτός: Η πηγή φωτός εκπέμπει φως διαφόρων μηκών κύματος (από υπεριώδη έως υπέρυθρες).
(Β) Πηγή Φωτισμού διέγερσης: Φως φωτός μετάδοσης ενός συγκεκριμένου μήκους κύματος που μπορεί να προκαλέσει φθορισμό στο δείγμα, ενώ μπλοκάρει το φως που είναι άχρηστο για συναρπαστικό φθορισμό.
(Γ) Δείγματα φθορισμού: Συνήθως χρωματίζονται με φθορίζουσες χρωστικές.
(Δ) Φίλτρο αποκλεισμού: Μεταδίδει επιλεκτικά φθορισμό εμποδίζοντας το φως διέγερσης που δεν απορροφάται από το δείγμα και ορισμένα μήκη κύματος στον φθορισμό μεταδίδονται επίσης επιλεκτικά. Ένα μικροσκόπιο που χρησιμοποιεί το υπεριώδες φως ως πηγή φωτός για να κάνει το φωτιζόμενο αντικείμενο να εκπέμπει φθορισμό. Το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο συναρμολογήθηκε για πρώτη φορά από τους Knorr και Haruska στο Βερολίνο της Γερμανίας το 1931. Αυτό το μικροσκόπιο χρησιμοποιεί δοκούς ηλεκτρονίων υψηλής ταχύτητας αντί για ελαφριές δοκούς. Λόγω του πολύ μικρότερου μήκους κύματος της ροής ηλεκτρονίων σε σύγκριση με τα φωτεινά κύματα, η μεγέθυνση ενός ηλεκτρονικού μικροσκοπίου μπορεί να φτάσει τα 8 0 0000 φορές, με ελάχιστο όριο ανάλυσης 0,2 νανόμετρων. Το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης, το οποίο χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά το 1963, επιτρέπει στους ανθρώπους να βλέπουν τις μικροσκοπικές δομές στην επιφάνεια των αντικειμένων.
3. Πεδίο εφαρμογής: Χρησιμοποιείται για τη μεγέθυνση εικόνων μικρών αντικειμένων. Που χρησιμοποιούνται γενικά για παρατηρήσεις της βιολογίας, της ιατρικής, των μικροσκοπικών σωματιδίων κ.λπ.
ομοεστιακό μικροσκόπιο
1. Το ομοεστιακό μικροσκόπιο προσθέτει ένα ημι -ανακλαστικό μισό φακό στην ανακλώμενη διαδρομή φωτός, η οποία εκτρέπει το ανακλώμενο φως που έχει περάσει από το φακό σε άλλες κατευθύνσεις. Στο επίκεντρο του, υπάρχει ένα διάφραγμα με μια οπή που βρίσκεται στο σημείο εστίασης και πίσω από το διάφραγμα είναι ένας σωλήνας φωτοπολλαπλασιασμού. Μπορεί να φανταστεί ότι το ανακλώμενο φως πριν και μετά την εστίαση του φωτός ανίχνευσης δεν μπορεί να επικεντρωθεί στη μικρή οπή μέσω αυτού του ομοεστιακού συστήματος και θα μπλοκαριστεί από το διάφραγμα. Έτσι, το φωτόμετρο μετρά την ένταση του ανακλώμενου φωτός στο σημείο εστίασης.
2. Αρχή: Τα παραδοσιακά οπτικά μικροσκόπια χρησιμοποιούν πηγές φωτός πεδίου και η εικόνα κάθε σημείου στο δείγμα επηρεάζεται από περίθλαση ή διάσπαρτο φως από γειτονικά σημεία. Το ομοεστιακό μικροσκόπιο σάρωσης με λέιζερ χρησιμοποιεί μια δέσμη λέιζερ για να φωτίσει μια οπή και να σχηματίσει μια πηγή φωτός σημείου για να σαρώσει κάθε σημείο στο εστιακό επίπεδο του δείγματος. Το φωτεινό σημείο στο δείγμα απεικονίζεται στην οπή ανίχνευσης και λαμβάνεται σημείο ανά σημείο ή γραμμή από έναν σωλήνα φωτομολογαλαίας (PMT) ή μια συσκευή ψυχρής σύζευξης (CCCD) μετά την ανίχνευση της πύργου, σχηματίζοντας γρήγορα μια εικόνα φθορισμού φθορισμού στην οθόνη του υπολογιστή. Η οπή φωτισμού και η ανίχνευση είναι συζευγμένες σε σχέση με το εστιακό επίπεδο του αντικειμενικού φακού. Τα σημεία στο εστιακό επίπεδο επικεντρώνονται ταυτόχρονα στην πύλη φωτισμού και στην οπή εκπομπής και τα σημεία εκτός του εστιακού επιπέδου δεν θα απεικονιστούν στην οπή ανίχνευσης. Η προκύπτουσα ομοεστιακή εικόνα είναι η οπτική διατομή του δείγματος, ξεπερνώντας το μειονέκτημα των θολών εικόνων σε γενικά μικροσκόπια.
