Αρχές μικροσκοπίας φθορισμού και δομικά χαρακτηριστικά
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι η χρήση υψηλής απόδοσης φωταύγειας του σημείου, μέσω του φιλτραρίσματος του συστήματος χρωμάτων για την εκπομπή ενός συγκεκριμένου μήκους κύματος φωτός (όπως το υπεριώδες 3650 στο ή το ιώδες-μπλε 4200 στο) ως το φως διέγερσης, η διέγερση του φθορίζοντος υλικού εντός του δείγματος εκπέμπει μια ποικιλία διαφορετικών χρωμάτων φθορισμού και στη συνέχεια μεγεθύνεται μέσω του αντικειμενικού φακού και των προσοφθάλμιων φακών για παρατήρηση. Με αυτόν τον τρόπο, στο υπόβαθρο ισχυρής αντίθεσης, ακόμα κι αν ο φθορισμός είναι πολύ αδύναμος, είναι εύκολο να εντοπιστεί, υψηλής ευαισθησίας, που χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της κυτταρικής δομής και λειτουργίας και χημικής σύνθεσης. Η βασική δομή ενός μικροσκοπίου φθορισμού αποτελείται από ένα συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο συν μερικά εξαρτήματα (όπως μια πηγή φωτός φθορισμού, φίλτρα διέγερσης, διαχωριστής δέσμης διπλού χρώματος και φίλτρα μπλοκαρίσματος κ.λπ.). Πηγή φωτός φθορισμού - γενικά χρησιμοποιούμενος λαμπτήρας υδραργύρου υπερυψηλής πίεσης (50-200W), ο οποίος μπορεί να εκπέμψει διάφορα μήκη κύματος φωτός, αλλά κάθε υλικό φθορισμού έχει το ισχυρότερο μήκος κύματος διέγερσης φθορισμού, επομένως απαιτείται προσθήκη φίλτρων διέγερσης (γενικά υπεριώδες, ιώδες, μπλε και πράσινο φίλτρο διέγερσης), έτσι ώστε μόνο ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός διέγερσης μέσω της ακτινοβολίας των δειγμάτων, ενώ το άλλο φως απορροφάται. Επομένως, είναι απαραίτητο να προστεθεί ένα φίλτρο διέγερσης (συνήθως φίλτρα διέγερσης υπεριώδους, ιώδους, μπλε και πράσινου), έτσι ώστε μόνο ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός διέγερσης να διαπερνά το δείγμα, ενώ άλλο φως απορροφάται. Όταν κάθε ουσία ακτινοβολείται με φως διέγερσης, εκπέμπει ορατό φθορισμό μεγαλύτερου μήκους κύματος από αυτόν του ακτινοβολούμενου φωτός μέσα σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα. Ο φθορισμός έχει ειδικότητα, γενικά ασθενέστερη από το φως διέγερσης, για να μπορέσουμε να παρατηρήσουμε τον συγκεκριμένο φθορισμό, πρέπει να επιλεγεί ο αντικειμενικός φακός πίσω από την ανάγκη προσθήκης αποκλεισμού (ή καταστολής) για χρήση.
Διαφορά μικροσκοπίου φθορισμού και συνηθισμένου μικροσκοπίου
1. Η μέθοδος φωτισμού είναι συνήθως πτώση, δηλαδή η πηγή φωτός προβάλλεται στο δείγμα μέσω του αντικειμενικού φακού.
2. Η πηγή φωτός είναι το υπεριώδες φως, με μικρότερο μήκος κύματος και μεγαλύτερη διακριτική ικανότητα από τα συνηθισμένα μικροσκόπια.
3. Υπάρχουν δύο ειδικά φίλτρα, το ένα μπροστά από την πηγή φωτός χρησιμοποιείται για να φιλτράρει το ορατό φως και αυτό που βρίσκεται ανάμεσα στον προσοφθάλμιο και τον αντικειμενικό φακό χρησιμοποιείται για να φιλτράρει το υπεριώδες φως για την προστασία του ανθρώπινου ματιού.
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι επίσης ένα είδος οπτικού μικροσκοπίου, η κύρια διαφορά είναι ότι το μήκος κύματος διέγερσης των δύο είναι διαφορετικό. Αυτό καθορίζει τη δομή του μικροσκοπίου φθορισμού και του συνηθισμένου οπτικού μικροσκοπίου και τη χρήση διαφορετικών μεθόδων.
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι το βασικό εργαλείο για την κυτταροχημεία του ανοσοφθορισμού. Αποτελείται από πηγή φωτός, σύστημα πλάκας φίλτρου και οπτικό σύστημα και άλλα κύρια εξαρτήματα. Χρησιμοποιεί ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός για να διεγείρει το δείγμα να εκπέμπει φθορισμό, ο οποίος μεγεθύνεται μέσω του αντικειμενικού φακού και του συστήματος προσοφθάλμιου φακού για να παρατηρήσει την εικόνα φθορισμού του δείγματος.
