Πώς να επιλέξετε μεταξύ ανεστραμμένου μικροσκοπίου και μικροσκοπίου φθορισμού;
Το μικροσκόπιο είναι ένα σημαντικό όργανο στην κυτταροκαλλιέργεια και σε σχετικά πειράματα παραγώγων. Επί του παρόντος, υπάρχουν διάφοροι τύποι μικροσκοπίων στην αγορά και η επιλογή ενός μικροσκοπίου που να καλύπτει τις ανάγκες και να είναι κατάλληλο αποτελεί πρόκληση. Παρακάτω, θα εισαγάγουμε τις αρχές των ανεστραμμένων μικροσκοπίων και των μικροσκοπίων φθορισμού για να επιλέξει ο καθένας.
Το ανεστραμμένο μικροσκόπιο, όπως ένα κανονικό μικροσκόπιο, αποτελείται κυρίως από τρία μέρη: μηχανικό μέρος, τμήμα φωτισμού και οπτικό μέρος. Η σύνθεση ενός ανεστραμμένου μικροσκοπίου είναι η ίδια με εκείνη ενός κανονικού κατακόρυφου μικροσκοπίου, με τη διαφορά ότι ο αντικειμενικός φακός και το σύστημα φωτισμού είναι αντίστροφα, με το πρώτο κάτω από τη σκηνή και το δεύτερο πάνω από τη σκηνή. Αυτή η δομή διευρύνει σημαντικά την αποτελεσματική απόσταση μεταξύ του συστήματος προβολέων φωτισμού και της σκηνής, καθιστώντας ευκολότερη την τοποθέτηση παχύτερων εργαλείων παρατήρησης, όπως πιάτα καλλιέργειας και μπουκάλια κυτταροκαλλιέργειας (φυσικά μπορούν να χρησιμοποιηθούν και γυάλινες διαφάνειες), ενώ η απόσταση εργασίας μεταξύ των αντικειμενικός φακός και το υλικό δεν χρειάζεται να είναι πολύ μεγάλο. Το ανεστραμμένο μικροσκόπιο χρησιμοποιείται από ιατρικά και υγειονομικά ιδρύματα, πανεπιστήμια και ερευνητικά ιδρύματα για την παρατήρηση μικροοργανισμών, κυττάρων, βακτηρίων, ιστοκαλλιεργειών, εναιωρημάτων, ιζημάτων κ.λπ. Μπορεί να παρατηρεί συνεχώς τη διαδικασία πολλαπλασιασμού και διαίρεσης κυττάρων και βακτηρίων στο μέσο καλλιέργειας και μπορεί να συλλάβει οποιαδήποτε μορφή αυτής της διαδικασίας. Χρησιμοποιείται ευρέως σε τομείς όπως η κυτταρολογία, η παρασιτολογία, η ογκολογία, η ανοσολογία, η γενετική μηχανική, η βιομηχανική μικροβιολογία και η βοτανική.
Το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιείται για τη μελέτη της απορρόφησης, μεταφοράς, κατανομής και εντοπισμού ουσιών μέσα στα κύτταρα. Για το υπό δοκιμή αντικείμενο, υπάρχουν δύο τρόποι δημιουργίας φθορισμού: αυθόρμητος φθορισμός, ο οποίος εκπέμπεται απευθείας από την υπεριώδη ακτινοβολία. Ο δευτερογενής φθορισμός εμφανίζεται όταν το παρατηρούμενο αντικείμενο υποβάλλεται σε επεξεργασία με φθορίζουσες βαφές και εκτίθεται σε υπεριώδες φως πριν εκπέμψει φθορισμό. Ορισμένες ουσίες στα κύτταρα, όπως η χλωροφύλλη, παράγουν αυθόρμητο φθορισμό μετά την έκθεση τους στην υπεριώδη ακτινοβολία. Ορισμένες ουσίες από μόνες τους μπορεί να μην εκπέμπουν φθορισμό, αλλά εάν χρωματιστούν με φθορίζουσες βαφές ή φθορίζοντα αντισώματα, μπορούν επίσης να εκπέμψουν δευτερογενή φθορισμό υπό υπεριώδη ακτινοβολία. Ένα μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιεί μια πηγή φωτός σημείου υψηλής φωτεινής απόδοσης για να εκπέμπει ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος φωτός (UV 365nm ή UV μπλε 420nm) μέσω ενός συστήματος φιλτραρίσματος χρώματος ως φως διέγερσης, το οποίο διεγείρει τις φθορίζουσες ουσίες στο δείγμα για να εκπέμπει διάφορα χρώματα φθορισμού. Μετά από αυτό, παρατηρείται μέσω της μεγέθυνσης του αντικειμενικού φακού και του προσοφθάλμιου φακού. Με αυτόν τον τρόπο, ακόμη και με αδύναμο φθορισμό, είναι εύκολα αναγνωρίσιμο και εξαιρετικά ευαίσθητο κάτω από έντονα αντίθετα υπόβαθρα. Χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της κυτταρικής δομής, λειτουργίας και χημικής σύνθεσης.
Το μικροσκόπιο φθορισμού μπορεί να χωριστεί σε δύο τύπους: τύπο μετάδοσης και τύπο πτώσης. Το πρώτο είναι πιο πρωτόγονο, ενώ το δεύτερο είναι πιο προχωρημένο. Η βασική κατασκευή των δύο τύπων μικροσκοπίων φθορισμού είναι παρόμοια, με κύρια διαφορά ότι το εκπεμπόμενο φως διέγερσης περνά μέσα από το δείγμα, παράγοντας φθορισμό στο σύνολό του. Στη συνέχεια, ο φθορισμός εισέρχεται στον αντικειμενικό φακό και όσο μεγαλύτερη είναι η μεγέθυνση, τόσο πιο αδύναμος είναι ο φθορισμός. Το φως διέγερσης που πέφτει προβάλλει στην επιφάνεια του δείγματος, παράγοντας φθορισμό που εισέρχεται στον αντικειμενικό φακό. Όσο μεγαλύτερη είναι η μεγέθυνση, τόσο ισχυρότερος είναι ο φθορισμός, καθιστώντας το κατάλληλο για παρατήρηση υψηλής ισχύος. Τα κύρια συστατικά ενός μικροσκοπίου φθορισμού περιλαμβάνουν μια πηγή φωτός λαμπτήρα υδραργύρου, μια πλάκα φίλτρου διέγερσης, ένα φασματοφωτόμετρο (τύπου σταγόνας), μια πλάκα φίλτρου καταστολής και έναν συμπυκνωτή σκοτεινού πεδίου (τύπος μετάδοσης). Επιπλέον, λόγω της έντονης θέρμανσης των λαμπτήρων υδραργύρου, οι περισσότεροι από αυτούς είναι επίσης εξοπλισμένοι με φίλτρα απορρόφησης θερμότητας. Ορισμένα μικροσκόπια φθορισμού έχουν επίσης αντικειμενικό αντίθεσης φάσης και κυκλικό άνοιγμα, επιτρέποντας την παρατήρηση αντίθεσης φάσης. Ορισμένα μικροσκόπια φθορισμού υιοθετούν μια ανεστραμμένη δομή, η οποία είναι επίσης ένα ανεστραμμένο μικροσκόπιο, και ούτω καθεξής.
Επιπλέον, τα προαναφερθέντα μικροσκόπια μπορούν να συναρμολογηθούν σε ψηφιακά μικροσκόπια με την εγκατάσταση CCD, η οποία μετατρέπει τις φυσικές εικόνες που βλέπει το μικροσκόπιο σε ψηφιακές αναλογικές εικόνες και τις απεικονίζει σε υπολογιστή. Ως αποτέλεσμα, μπορούμε να μετατοπίσουμε την έρευνά μας στο μικροπεδίο από την παραδοσιακή διόφθαλμη παρατήρηση στην αναπαραγωγή μέσω οθονών, βελτιώνοντας έτσι την αποδοτικότητα της εργασίας.
