Ενισχυμένα πλεονεκτήματα της μικροσκοπίας πολλαπλών φωτονίων σάρωσης λέιζερ
Το πολυφωτονικό μικροσκόπιο σάρωσης με λέιζερ είναι μια σημαντική βελτίωση της οπτικής μικροσκοπίας, που εκδηλώνεται κυρίως στην ικανότητα παρατήρησης βαθιών δομών ζωντανών κυττάρων, σταθερών κυττάρων και ιστών και λήψη καθαρών και ευκρινών δομών πολλαπλών στρωμάτων Z-επίπεδο, συγκεκριμένα οπτικές φέτες, οι οποίες μπορούν να να χρησιμοποιηθούν για την κατασκευή τρισδιάστατων συμπαγών δομών δειγμάτων. Το ομοεστιακό μικροσκόπιο χρησιμοποιεί μια πηγή φωτός λέιζερ, η οποία επεκτείνεται για να γεμίσει ολόκληρο το εστιακό επίπεδο του αντικειμενικού φακού και στη συνέχεια συγκλίνει σε πολύ μικρά σημεία στο εστιακό επίπεδο του δείγματος μέσω του συστήματος φακών του αντικειμενικού φακού. Σύμφωνα με το αριθμητικό διάφραγμα του αντικειμενικού φακού, η διάμετρος του φωτεινού σημείου φωτισμού είναι περίπου 0.25-0,8 μ m και το βάθος είναι περίπου 0.{{7} }.5 μ m. Το μέγεθος του συνεστιακού σημείου καθορίζεται από το σχεδιασμό του μικροσκοπίου, το μήκος κύματος του λέιζερ, τα αντικειμενικά χαρακτηριστικά, τις ρυθμίσεις κατάστασης της μονάδας σάρωσης και τις ιδιότητες του δείγματος. Το εύρος φωτισμού και το βάθος ενός μικροσκοπίου πεδίου είναι μεγάλα, ενώ ο φωτισμός ενός ομοεστιακού μικροσκοπίου εστιάζεται σε ένα εστιακό σημείο στο εστιακό επίπεδο. Το βασικό πλεονέκτημα της ομοεστιακής μικροσκοπίας είναι ότι μπορεί να εκτελέσει λεπτή οπτική τομή σε παχιά φθορίζοντα δείγματα (έως 50 μ m ή περισσότερο), με πάχος περίπου 0,5 έως 1,5 μ m. Η σειρά των εικόνων οπτικής τομής μπορεί να ληφθεί μετακινώντας το δείγμα πάνω και κάτω χρησιμοποιώντας τον βηματικό κινητήρα του άξονα Z του μικροσκοπίου. Η συλλογή πληροφοριών εικόνας ελέγχεται εντός του επιπέδου * *, χωρίς παρεμβολές από σήματα που εκπέμπονται από άλλες θέσεις στο δείγμα. Μετά την αφαίρεση της επιρροής του φθορισμού φόντου και την αύξηση της αναλογίας σήματος προς θόρυβο, η αντίθεση και η ανάλυση των ομοεστιακών εικόνων βελτιώνονται σημαντικά σε σύγκριση με τις παραδοσιακές εικόνες φθορισμού φωτισμού πεδίου. Σε πολλά δείγματα, περίπλοκα δομικά στοιχεία συνυφαίνονται για να σχηματίσουν πολύπλοκα συστήματα, αλλά μόλις συλλεχθούν αρκετά οπτικά τμήματα, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε λογισμικό για την ανακατασκευή τους σε τρεις διαστάσεις. Αυτή η πειραματική μέθοδος έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στη βιολογική έρευνα για την αποσαφήνιση των πολύπλοκων δομικών και λειτουργικών σχέσεων μεταξύ κυττάρων ή ιστών.
