Μέτρηση Μικροβιακής Ποσότητας - Μικροσκοπική Μέθοδος Απευθείας Καταμέτρησης!
Η ανάπτυξη των βακτηριακών πληθυσμών χαρακτηρίζεται από αύξηση του αριθμού των κυττάρων ή αύξηση του κυτταρικού υλικού. Υπάρχουν διάφορες μέθοδοι για τη μέτρηση των αριθμών των κυττάρων, όπως η άμεση μικροσκοπική μέτρηση, η μέτρηση πλακών, η στροβιλομέτρηση με φασματοφωτόμετρο, ο πιο πιθανός αριθμός MPN και η διήθηση μεμβράνης. Οι μέθοδοι μέτρησης κυτταρικών ουσιών περιλαμβάνουν τη μέτρηση του ξηρού βάρους των κυττάρων, τη μέτρηση της περιεκτικότητας σε ορισμένα συστατικά των κυττάρων όπως το άζωτο, το RNA και το DNA και τη μέτρηση των μεταβολικών προϊόντων. Συνοπτικά, υπάρχουν πολλές μέθοδοι για τη μέτρηση της μικροβιακής ανάπτυξης, η καθεμία με τα δικά της πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα, και η επιλογή πρέπει να βασίζεται σε συγκεκριμένες απαιτήσεις στην εργασία. Αυτό το πείραμα εισάγει κυρίως την ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδο άμεσης μέτρησης μικροσκοπίου στην παραγωγή και την επιστημονική έρευνα.
Απαιτήσεις σκοπού
1. Διευκρινίστε την αρχή της χρήσης πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων για τη μέτρηση.
2. Κατακτήστε τη μέθοδο χρήσης πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων για μικροβιακή μέτρηση.
2, Βασικές Αρχές
Η μέθοδος μικροσκοπικής άμεσης μέτρησης είναι μια απλή, γρήγορη και διαισθητική μέθοδος απευθείας μέτρησης μιας μικρής ποσότητας αιωρήματος ενός δείγματος κάτω από μικροσκόπιο τοποθετώντας το σε μια ειδική γυάλινη πλάκα με συγκεκριμένη περιοχή και όγκο (γνωστή και ως μετρητής βακτηρίων). Επί του παρόντος, οι συσκευές μέτρησης βακτηρίων που χρησιμοποιούνται συνήθως στο εσωτερικό και στο εξωτερικό περιλαμβάνουν πλάκες μέτρησης αιμοσφαιρίων, συσκευές μέτρησης βακτηρίων Peteroff Hauser και συσκευές μέτρησης βακτηρίων Hawksley, οι οποίες μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη μέτρηση εναιωρημάτων ζύμης, βακτηρίων, σπόρων μυκήτων κ.λπ. με την ίδια βασική αρχή. Οι δύο τελευταίοι τύποι μετρητών βακτηρίων έχουν συνολικό όγκο {{0}}},02 mm3 αφού καλυφθούν με γυαλί κάλυψης και η απόσταση μεταξύ του γυαλιού καλύμματος και της πλάκας φορέα είναι μόνο 0,02 mm. Επομένως, ένας στόχος εμβάπτισης λαδιού μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την παρατήρηση και την καταμέτρηση μικρότερων κυττάρων όπως τα βακτήρια. Εκτός από τη χρήση αυτών των μετρητών βακτηρίων, υπάρχει επίσης μια μέθοδος εκτίμησης για την άμεση παρατήρηση της αναλογίας της περιοχής επιχρίσματος προς την περιοχή του αγρού κάτω από ένα μικροσκόπιο, η οποία χρησιμοποιείται γενικά για τη βακτηριολογική εξέταση του γάλακτος. Τα πλεονεκτήματα της άμεσης μέτρησης με μικροσκόπιο είναι διαισθητικά, γρήγορα και εύκολα στη χρήση. Όμως το μειονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι ότι τα μετρούμενα αποτελέσματα είναι συνήθως το άθροισμα νεκρών και ζωντανών κυττάρων. Επί του παρόντος, υπάρχουν ορισμένες μέθοδοι που μπορούν να ξεπεράσουν αυτό το μειονέκτημα, όπως ο συνδυασμός καλλιέργειας θαλάμου χρώσης ζωντανών κυττάρων (σύντομο χρονικό διάστημα) και η προσθήκη αναστολέων κυτταρικής διαίρεσης για να επιτευχθεί ο στόχος της μέτρησης μόνο ζωντανών κυττάρων.
Χρήση πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων ως παράδειγμα για άμεση μέτρηση κάτω από μικροσκόπιο. Οι μέθοδοι χρήσης των άλλων δύο μετρητών βακτηρίων βρίσκονται στα εγχειρίδια διαφόρων κατασκευαστών. Η απευθείας μέτρηση κάτω από ένα μικροσκόπιο χρησιμοποιώντας μια πλάκα μέτρησης αιμοσφαιρίων είναι μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος για τη μικροβιακή μέτρηση. Ο πίνακας μέτρησης είναι μια ειδικά κατασκευασμένη γυάλινη τσουλήθρα με τέσσερις αυλακώσεις που σχηματίζουν τρεις πλατφόρμες πάνω της. Η ευρύτερη πλατφόρμα στη μέση χωρίζεται σε δύο μισά με μια μικρή οριζόντια αυλάκωση και υπάρχει ένα πλέγμα σε κάθε πλευρά της πλατφόρμας. Κάθε πλέγμα χωρίζεται σε εννέα μεγάλα πλέγματα και το μεγάλο πλέγμα στη μέση είναι η αίθουσα μέτρησης. Η δομή της πλάκας μέτρησης των κυττάρων αίματος φαίνεται στο Σχήμα l{{0}}. Η κλίμακα της αίθουσας μέτρησης έχει γενικά δύο προδιαγραφές. Το ένα είναι ότι ένα μεγάλο τετράγωνο χωρίζεται σε 25 μεσαία τετράγωνα και κάθε τετράγωνο χωρίζεται περαιτέρω σε 16 μικρά τετράγωνα (Εικόνα 15-2). Μια άλλη μέθοδος είναι να διαιρέσετε ένα μεγάλο τετράγωνο σε 16 μεσαία τετράγωνα και κάθε τετράγωνο χωρίζεται περαιτέρω σε 25 μικρά τετράγωνα. Ωστόσο, ανεξάρτητα από το μέγεθος του πίνακα μέτρησης, υπάρχουν 400 μικρά τετράγωνα σε κάθε μεγάλο τετράγωνο. Αν το μήκος της πλευράς κάθε τετραγώνου είναι 1mm, το εμβαδόν κάθε μεγάλου τετραγώνου είναι lmm2. Μετά την κάλυψη με γυαλί κάλυψης, το ύψος μεταξύ του γυαλιού του καλύμματος και της διαφάνειας είναι 0,1 mm, επομένως ο όγκος του χώρου μέτρησης είναι 0,1 mm3 (ένα χιλιοστό του χιλιοστού). Εικόνα 15-1 Δομή πίνακα μέτρησης αιμοσφαιρίων (I) Εικόνα 15-2 Δομή πίνακα μέτρησης κυττάρων αίματος (II) Μπροστινή όψη. Β. Όψη κάθετης τομής. Το μεγεθυσμένο πλέγμα έχει ένα μεγάλο τετράγωνο στη μέση ως αίθουσα μέτρησης 1. Πίνακας μέτρησης αιμοσφαιρίων. 2. Γυαλί καλύμματος. Κατά τη μέτρηση στην αίθουσα μέτρησης, ο συνολικός αριθμός βακτηρίων υπολογίζεται συνήθως για πέντε τετράγωνα, στη συνέχεια λαμβάνεται η μέση τιμή κάθε τετραγώνου, πολλαπλασιαζόμενη επί 25 ή 16 για να ληφθεί ο συνολικός αριθμός βακτηρίων σε ένα μεγάλο τετράγωνο, το οποίο στη συνέχεια μετατρέπεται σε συνολικός αριθμός βακτηρίων στο βακτηριακό διάλυμα lml. Υποθέτοντας ότι ο συνολικός αριθμός βακτηρίων σε πέντε τετραγωνικά πλέγματα είναι Α και ο συντελεστής αραίωσης του βακτηριακού διαλύματος είναι Β. Εάν υπάρχουν 25 πλάκες μέτρησης στο τετράγωνο πλέγμα, ο συνολικός αριθμός βακτηρίων σε 1 mL βακτηριακού διαλύματος είναι A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Ομοίως, εάν υπάρχουν 16 πλάκες μέτρησης στο τετράγωνο πλέγμα, ο συνολικός αριθμός βακτηρίων σε 1 mL βακτηριακού διαλύματος είναι A/5 × 16 × 104 × B=32000A · σι
