Τάξη Μικροσκοπικής Απεικόνισης 丨Μικροσκόπιο φθορισμού ευρέως πεδίου
Σε εφαρμογές απεικόνισης ζωντανών κυττάρων, η μικροσκοπία φθορισμού ευρέως πεδίου διευκολύνει την παρατήρηση της δυναμικής των προσκολλημένων κυττάρων που αναπτύσσονται σε συγκεκριμένους περιβαλλοντικούς θαλάμους που τοποθετούνται στο στάδιο του μικροσκοπίου. Στην πιο βασική του διαμόρφωση, ένα τυπικό μικροσκόπιο ανεστραμμένης καλλιέργειας ιστού εξοπλισμένο με φωτισμό φθορισμού EPI συνδυάζεται με ένα σύστημα ανιχνευτή διάταξης περιοχής (συνήθως μια κάμερα CCD), κατάλληλα φίλτρα φθορισμού και ένα σύστημα κλείστρου για τον περιορισμό της υπερβολικής έκθεσης των κυττάρων σε επιβλαβές φως διέγερσης . Η βασική μικροσκοπία φθορισμού βασίζεται σε προσεκτικά ταιριασμένα φίλτρα παρεμβολής για την επιλογή συγκεκριμένων εύρους ζώνης για φωτισμό και ανίχνευση του εκπεμπόμενου φωτός. Οι πηγές φωτός περιλαμβάνουν λάμπες τόξου υδραργύρου, ξένον και αλογονιδίου μετάλλου, συστήματα λέιζερ με επέκταση δέσμης και δίοδοι εκπομπής φωτός (LED), τα οποία απαιτούν διαφορετικές προδιαγραφές φίλτρου. Τα συνθετικά φθοροφόρα που χρησιμοποιούνται στη μικροσκοπία φθορισμού έχουν φάσματα εκπομπής που καλύπτουν τις σχεδόν υπεριώδεις, ορατές και σχεδόν υπέρυθρες περιοχές. Η χρήση γενετικά κωδικοποιημένων φθοριζουσών πρωτεϊνών έχει επεκτείνει σημαντικά τις δυνατότητες της μικροσκοπίας φθορισμού στην απεικόνιση ζωντανών κυττάρων, επιτρέποντας στους ερευνητές να στοχεύουν με ακρίβεια τις υποκυτταρικές περιοχές ενδιαφέροντος.
Το Nuohai LS 18, ένας νέος τύπος μικροσκοπίου φωτισμού φύλλων φωτός που αναπτύχθηκε ανεξάρτητα από τη Nuohai, είναι ειδικά σχεδιασμένο για υψηλής ανάλυσης τρισδιάστατη απεικόνιση διαφανών μεγάλων δειγμάτων ιστού και είναι αφιερωμένο στην εξερεύνηση διαφόρων ανέπαφων ιστών όπως ο εγκέφαλος, ο σπλήνας, το λεπτό έντερο. , νεφρός, πνεύμονας, καρδιά και όγκος. Τρισδιάστατη ακριβής δομή οργάνων.
Στον φθορισμό ευρέος πεδίου, η εκπομπή πλήρους διαφράγματος που συλλέγεται από το αντικειμενικό μικροσκόπιο μεγιστοποιεί το καταγεγραμμένο σήμα ενώ ελαχιστοποιεί τον απαιτούμενο χρόνο έκθεσης. Έτσι, τα δείγματα μπορούν να απεικονιστούν με πολύ μικρές περιόδους φωτός. Το κύριο μειονέκτημα της απεικόνισης ευρέος πεδίου είναι ότι ο φθορισμός από περιοχές μακριά από το εστιακό επίπεδο, καθώς και το σήμα φόντου, είναι ανεπιθύμητο φως που συχνά κρύβει χαρακτηριστικά ενδιαφέροντος. Ως εκ τούτου, η απεικόνιση ευρέος πεδίου αποδίδει τα καλύτερα αποτελέσματα όταν τα χαρακτηριστικά που μας ενδιαφέρουν είναι μεγάλα (όπως τα οργανίδια) ή με μεγάλη στίξη στη φύση. Μια μεγάλη ποικιλία δειγμάτων ζωντανών κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων προσκολλημένων κυττάρων, βακτηρίων, ζυμομυκήτων και πολύ λεπτών τμημάτων ιστού, είναι ιδανικοί υποψήφιοι για απεικόνιση φθορισμού ευρέως πεδίου, ωστόσο, οι παχύτεροι ιστοί (πάνω από 5 μικρά) χρησιμοποιούνται καλύτερα με απεικόνιση πιο προηγμένης μεθόδου.
Αν και έχουν σημειωθεί πολλές πρόοδοι στην απεικόνιση φθορισμού με συνθετικές φθορίζουσες βαφές, κβαντικές κουκκίδες και φθορίζουσες πρωτεΐνες, σε ορισμένες περιπτώσεις είναι χρήσιμο να συνδυαστεί ο φθορισμός με άλλες μεθόδους απεικόνισης. Για παράδειγμα, το DIC μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με φθορισμό ευρέως πεδίου για την παρακολούθηση της βιωσιμότητας των κυττάρων και της γενικής μορφολογίας κατά τη μελέτη φαινομένων ενδιαφέροντος για συγκεκριμένους επισημασμένους στόχους. Η απόκτηση DIC και φθορισμού σε μία μόνο εικόνα είναι συνήθως μη πρακτική, αλλά σε ένα σωστά διαμορφωμένο μικροσκόπιο οι δύο τεχνικές μπορούν να χρησιμοποιηθούν διαδοχικά. Έτσι, μετά την απεικόνιση σε λειτουργία επιφθορισμού, μπορούν να ληφθούν εικόνες DIC από δείγματα σημασμένα με φθορισμό χρησιμοποιώντας εκπεμπόμενο φως. Οι δύο εικόνες μπορούν να συγχωνευθούν κατά τη μετα-ανάλυση. Η ταυτόχρονη λήψη εικόνων DIC και φθορισμού είναι δυνατή σε προηγμένες διαμορφώσεις μικροσκοπίου ευρέως πεδίου χρησιμοποιώντας φασματικά διαχωρισμένο φωτισμό (όπως ορατό και κοντινό υπέρυθρο) και προσαρμογείς κάμερας διπλής κάμερας ή διαιρούμενης προβολής. Στα περισσότερα ομοεστιακά μικροσκόπια σάρωσης λέιζερ, οι εικόνες μπορούν να ληφθούν ταυτόχρονα και σε λειτουργίες φθορισμού και DIC, εξαλείφοντας την ανάγκη για επεξεργασία μετά τη λήψη. Η αντίθεση φάσης και η αντίθεση διαμόρφωσης Hoffman μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν σε συνδυασμό με μικροσκοπία φθορισμού ευρέως πεδίου. Ωστόσο, σε αυτές τις τεχνικές, ο αντικειμενικός φακός είναι ειδικός, είτε πρόκειται για δακτύλιο φάσης είτε για πλάκα διαμόρφωσης Hoffman, θα προκαλέσει απώλεια της έντασης εκπομπής 5-15 τοις εκατό .
Σύνδεσμος άρθρου: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
