Απαιτήσεις πάχους οπτικού μικροσκοπίου για γυάλινες πλάκες
Μικροσκοπική αφυδάτωση και προσάρτηση δείγματος: Λόγω της επαναλαμβανόμενης φυγοκέντρησης, τα κύτταρα χάνονται, επομένως είναι καλύτερο να στερεωθούν τα κύτταρα στην επιφάνεια μιας γυάλινης πλάκας ή πλαστικού φύλλου για οπτική μικροσκοπία, έτσι ώστε τα κύτταρα να αφυδατωθούν και να στεγνώσουν μαζί με το γυαλί. τσουλήθρα ή πλαστικό φύλλο. Απαιτήσεις για το πάχος των γυάλινων πλακών σε οπτικό μικροσκόπιο Για να επιτραπεί στα κύτταρα να προσκολληθούν σε γυάλινες πλάκες ή πλαστικά φύλλα, είναι απαραίτητο να τοποθετηθεί πρώτα ένα στρώμα μεμβράνης σε γυάλινες πλάκες ή πλαστικά φύλλα. Η μέθοδος τοποθέτησης της μεμβράνης είναι η εξής:
(1) Η απλούστερη μέθοδος για οπτική μικροσκοπία είναι η τοποθέτηση ενός λεπτού στρώματος από πολυβινυλικό επίσημο φιλμ (formvar). Μουλιάστε τις καθαρισμένες πλάκες σε (0.5-1) επί τοις εκατό διάλυμα χλωροφορμίου πολυβινυλίου. Αφού εξατμιστεί η ατμόσφαιρα, εμφανίζεται μια λευκή μεμβράνη στις διαφάνειες. Ανακινήστε τις αντικειμενοφόρους πολλές φορές στο χλωροφόρμιο για να αλλάξει η μεμβράνη. Λεπτό και έτοιμο για χρήση.
(2) Ρίξτε 0.1 πολυ-L-λυσίνη γεωγραφικού πλάτους (διαλύστε 1 mg πολυ-λυσίνης σε 1 ml φιλτραρισμένου νερού κατά την προετοιμασία) στην καθαρισμένη γυάλινη πλάκα και βάλτε την σε ένα κουτί παροχής στους 450 C αφού ξεδιπλωθεί το σταγονίδιο . ξηρός. Αυτή η μέθοδος είναι καλύτερη επειδή η πολυ-L-λυσίνη είναι θετικά φορτισμένη, επιτρέποντας σε περισσότερα επιφανειακά αρνητικά φορτισμένα κύτταρα να προσκολληθούν.
(3) Προσθέστε πλάσμα και γλυκερίνη σε απεσταγμένο νερό σε αναλογία (30--40) τοις εκατό και (3-5) τοις εκατό σύμφωνα με τις απαιτήσεις του οπτικού μικροσκοπίου για το πάχος της αντικειμενοφόρου πλάκας για να σχηματιστεί μια πρωτεΐνη γλυκερίνης λύση. Το υγρό πέφτει στην καθαρισμένη γυάλινη πλάκα, ξεδιπλώνεται και στεγνώνει κάτω από το οπτικό μικροσκόπιο. Το στρωμένο φιλμ πρωτεΐνης βυθίζεται σε γλουταραλδεΰδη 2 τοις εκατό για να στερεωθεί η πρωτεΐνη, πλένεται και στεγνώνει για μελλοντική χρήση. Πριν από τη χρήση, το πλάσμα πέφτει στο φιλμ πρωτεΐνης Κάντε το "ενεργοποιημένο", ξεπλύνετε με ρυθμιστικό διάλυμα μετά από 30 λεπτά και μπορεί να εφαρμοστεί απευθείας.
Τα σταθεροποιημένα και καθαρισμένα κύτταρα μετατρέπονται σε κατάλληλη συγκέντρωση αιωρήματος κυττάρων με φιλτραρισμένο νερό κάτω από ψηφιακό μικροσκόπιο και το οπτικό μικροσκόπιο τοποθετείται σε γυάλινη πλάκα ή πλαστικό φύλλο που έχει καλυφθεί με μεμβράνη και τοποθετείται σε υγρό, χαμηλό θερμοκρασία (4{7}}C) περιβάλλον ( 30-120) λεπτά για να επιτραπεί στα κύτταρα να προσκολληθούν στη μεμβράνη. Χρησιμοποιήστε λεπτά τσιμπιδάκια για να σηκώσετε τη γυάλινη πλάκα και να την ανακινήσετε σε καθαρό διπλά απεσταγμένο νερό και να ξεπλύνετε τα μη συνδεδεμένα κύτταρα με ένα οπτικό μικροσκόπιο. Απαιτήσεις για το πάχος των πλακών στα οπτικά μικροσκόπια Τα πολωτικά μικροσκόπια τοποθετούνται στη συνέχεια γρήγορα σε ένα δοχείο γεμάτο με 50 τοις εκατό ακετόνη (ή αιθανόλη). Η διαδικασία αφυδάτωσης είναι να τοποθετηθούν οι αντικειμενοφόρες πλάκες σε ακετόνη ή αιθανόλη με αυξανόμενη συγκέντρωση κάθε 3 λεπτά, και στο οπτικό μικροσκόπιο ή να αυξηθεί συνεχώς η συγκέντρωση του παράγοντα αφυδάτωσης στο δοχείο γυάλινης πλάκας. Σύμφωνα με την εργαστηριακή εμπειρία του συγγραφέα, η τελευταία λειτουργία είναι πιο βολική. Η συγκεκριμένη μέθοδος οπτικής μικροσκοπίας μπορεί να αναρροφά το μισό αφυδατωτικό παράγοντα στο δοχείο κάθε 3 λεπτά και στη συνέχεια να προσθέσει ίση ποσότητα αφυδατικού παράγοντα με συγκέντρωση 100 τοις εκατό. Μετά από 5-6 επεμβάσεις, η συγκέντρωση του παράγοντα αφυδάτωσης στο δοχείο τιμής του μικροσκοπίου φτάνει πάνω από 0,5 τοις εκατό και τα κύτταρα αφυδατώνονται με επιτυχία. Μετά το στέγνωμα του κρίσιμου σημείου, η γυάλινη πλάκα ή το πλαστικό φύλλο κολλάται στην αποβάθρα του δείγματος με αγώγιμη κόλλα για μεταλλική επίστρωση. Υπάρχουν επίσης ευκολίες για τη σύνδεση κυττάρων σε μεμβράνες που ορίζονται από την τρίτη μέθοδο. Το οπτικό μικροσκόπιο μπορεί να κρεμάσει τα κύτταρα που στερεώνονται με χαμηλή συγκέντρωση γλουταραλδεΰδης στο «ενεργοποιημένο» φιλμ πρωτεΐνης. Το οπτικό μικροσκόπιο απαιτεί να τοποθετηθεί το πάχος της γυάλινης πλάκας για 10 λεπτά και η γυάλινη πλάκα ή το πλαστικό φύλλο να εμποτιστεί σε 2 τοις εκατό γλουταραλδεΰδη. Μετά από 30 λεπτά, ξεπλύνετε με φιλτραρισμένο διπλά απεσταγμένο νερό και στη συνέχεια αφυδατώστε, στεγνώστε και με μεταλλική επίστρωση σύμφωνα με την παραπάνω μέθοδο.
