PH meter - Προσδιορισμός και ρύθμιση pH μέσου
Όλοι οι μικροοργανισμοί επηρεάζονται από το pH του περιβάλλοντος στο οποίο ζουν. Συχνά, η παρουσία επιλεκτικών ειδών περιορίζει το εύρος του pH στο οποίο αναπτύσσονται. Μερικές φορές, η οξύτητα ή η αλκαλικότητα του μέσου μπορεί επίσης να λειτουργήσει ως παράγοντας επιλογής ανάπτυξης. Για βιοχημικά μέσα δοκιμής, ωστόσο, το εύρος pH στο οποίο οι μικροοργανισμοί εμφανίζουν δραστηριότητα tk στο υπόστρωμα είναι μικρότερο από το εύρος pH που απαιτείται για την ανάπτυξη: επομένως, είναι σημαντικό να ρυθμίσετε το pH του μέσου στο αναμενόμενο εύρος. Όταν το εργαστήριο προετοιμάζει το μέσο σύμφωνα με τη σύνθεση του μέσου, το pH πρέπει να ελεγχθεί και να ρυθμιστεί. Πρέπει να σημειωθεί ότι ακόμη και για το έτοιμο συνθετικό αφυδατωμένο μέσο που παρέχεται από τον κατασκευαστή (ειδικά για κάποιο απόθεμα αφυδατωμένο μέσο), το τελικό pH χρειάζεται να μετρηθεί μετά την κατασκευή του πειραματικού μέσου.
Ο πιο ακριβής τρόπος μέτρησης του pH ενός μέσου είναι με ένα pHόμετρο. Πριν από τη χρήση, πρέπει να βαθμονομηθεί με ένα τυπικό ρυθμιστικό διάλυμα γνωστού pH (συνήθως το pH είναι 4 έως 7). Ξεπλύνετε το ηλεκτρόδιο του μετρητή pH με απεσταγμένο νερό και βυθίστε το στο μέσο καλλιέργειας στο ποτήρι ζέσεως και, στη συνέχεια, διαβάστε το pH του μέσου καλλιέργειας από την κλίμακα του μετρητή pH. Κάθε κατασκευαστής παρέχει λεπτομερείς οδηγίες λειτουργίας για κάθε τύπο μετρητή pH.
Κατά την προετοιμασία του μέσου καλλιέργειας, το PH μπορεί να ρυθμιστεί εύκολα χρησιμοποιώντας ένα μετρητή pH με μηχανική ανάδευση. Το μέσο καλλιέργειας πρέπει να παρασκευάζεται σε δοχείο (όπως ένα μεγάλο ποτήρι) που μπορεί να αναδεύεται συνεχώς. ή μαγνήτες τυλιγμένο με τεφλόν. Το pH του μέσου που περιέχει άγαρ πρέπει να ρυθμιστεί μετά την απόψυξη, κάτι που γίνεται εύκολα με θερμαινόμενο μαγνητικό αναδευτήρα. Κατά τη ρύθμιση του pH, χρησιμοποιήστε ένα τυπικό ρυθμιστικό διάλυμα γνωστού pH για να βαθμονομήσετε πρώτα το pHόμετρο. Στη συνέχεια, βάλτε το σύνθετο ηλεκτρόδιο και το θερμόμετρο αντίστασης (αν υπάρχει) στο μέσο, προσθέστε αργά την κατάλληλη ποσότητα υδροχλωρικού οξέος και υδροξειδίου του νατρίου από το άκρο του ποτηριού μακριά από το ηλεκτρόδιο, έτσι ώστε το μέσο να φτάσει και να διατηρήσει το απαιτούμενο pH.
Η αντιστάθμιση θερμοκρασίας του μετρητή pH θα πρέπει να λαμβάνει υπόψη την επίδραση της θερμοκρασίας στο σύστημα ηλεκτροδίων: σε ορισμένες αραιώσεις και μέσα, το pH αλλάζει σημαντικά με τη θερμοκρασία. Για υγρά μέσα και αραιώσεις, το pH μπορεί συνήθως να ρυθμιστεί και να μετρηθεί είτε στους 25 βαθμούς είτε στη θερμοκρασία στην οποία χρησιμοποιούνται.
Το pH του μέσου άγαρ πρέπει να ρυθμιστεί μετά τη διάλυση και η θερμοκρασία διάλυσης είναι πάνω από 45 βαθμούς: επομένως, το pH του στερεού μέσου θα πρέπει να προσδιορίζεται στη θερμοκρασία χρήσης του. Αυτή τη στιγμή, θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί ένα σύνθετο ηλεκτρόδιο επίπεδης κεφαλής και η αντιστάθμιση θερμοκρασίας του μετρητή pH θα πρέπει να βαθμονομηθεί χειροκίνητα. Κατά την παρασκευή του μέσου καλλιέργειας, εάν καθοριστεί ότι το pH του μέσου καλλιέργειας είναι διαφορετικό μεταξύ της κατάστασης τήξης και της κατάστασης στερεοποίησης, σημαίνει ότι υπάρχει σφάλμα στη ρύθμιση του pH.
Ομοίως, όταν το παρασκευασμένο μέσο αποστειρώνεται με θερμότητα (π.χ. σε αυτόκλειστο), μπορεί επίσης να υποστεί αλλαγές στο pH. Για το αφυδατωμένο μέσο, ο κατασκευαστής το έχει λάβει υπόψη του και συνήθως δεν χρειάζεται να ρυθμίσετε το pH, αλλά το pH του προς χρήση μέσου θα πρέπει να ελέγχεται προσεκτικά. Εάν το pH του αφυδατωμένου μέσου άγαρ πρέπει να ρυθμιστεί κατά την επαναδιάλυση ή την παρασκευή, είναι καλύτερο να το ρυθμίσετε με αποστειρωμένο με φίλτρο διάλυμα υδροχλωρικού οξέος και υδροξειδίου του νατρίου μετά το στάδιο της αποστείρωσης για να αποφευχθεί ο σχηματισμός υπερθέρμανσης του μέσου. Κατά την παρασκευή μέσων με διαφορετικές πρώτες ύλες ή φαρμακευτικά προϊόντα, το pH του μέσου πρέπει να ελέγχεται μετά την αποστείρωση σε αυτόκλειστο. Επιπλέον, εάν το pH του μέσου διαπιστωθεί ότι αλλάζει το ίδιο μετά από κάθε αυτόκλειστο, το pH μπορεί να ρυθμιστεί κατάλληλα κατά την προετοιμασία του μέσου. Ωστόσο, εξακολουθεί να είναι απαραίτητος ο προσδιορισμός του τελικού pH του μέσου μετά την αποστείρωση.
