Αρχή και δομικά χαρακτηριστικά του μικροσκοπίου φθορισμού
Το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιεί ένα σημείο με υψηλή φωτεινή απόδοση για να εκπέμπει φως με ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος (όπως το υπεριώδες φως 3650 ή το ιώδες-μπλε φως 4200) μέσω του συστήματος έγχρωμου φίλτρου ως φως διέγερσης και στη συνέχεια διεγείρει τις φθορίζουσες ουσίες στο δείγμα για να εκπέμψουν φθορισμού με διαφορετικά χρώματα, και στη συνέχεια τα παρατηρεί μέσω της ενίσχυσης του αντικειμενικού φακού και του προσοφθάλμιου φακού. Με αυτόν τον τρόπο, κάτω από το ισχυρό φόντο αντίθεσης, ακόμα κι αν ο φθορισμός είναι πολύ ασθενής, είναι εύκολο να αναγνωριστεί και έχει υψηλή ευαισθησία. Χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της κυτταρικής δομής και λειτουργίας και της χημικής σύνθεσης. Η βασική δομή του μικροσκοπίου φθορισμού αποτελείται από συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο και ορισμένα εξαρτήματα (όπως πηγή φωτός φθορισμού, φίλτρο διέγερσης, διαχωριστής διχρωμίας δέσμης και φίλτρο μπλοκαρίσματος κ.λπ.). Πηγή φωτός φθορισμού —— Χρησιμοποιείται γενικά λαμπτήρας υδραργύρου υπερυψηλής πίεσης (50-200W), ο οποίος μπορεί να εκπέμπει φως με διάφορα μήκη κύματος, αλλά κάθε φθορίζουσα ουσία έχει ένα μήκος κύματος φωτός διέγερσης που παράγει τον ισχυρότερο φθορισμό, επομένως είναι είναι απαραίτητο να προστεθούν φίλτρα διέγερσης (γενικά φίλτρα διέγερσης υπεριώδους, μωβ, μπλε και πράσινου), έτσι ώστε μόνο ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός διέγερσης να μεταδίδεται στο δείγμα και να απορροφάται όλο το άλλο φως. Αφού κάθε ουσία ακτινοβοληθεί από φως διέγερσης, εκπέμπει ορατό φθορισμό μεγαλύτερο από το μήκος κύματος της ακτινοβολίας σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα. Ο φθορισμός έχει ειδικότητα, η οποία είναι γενικά πιο αδύναμη από το φως διέγερσης. Προκειμένου να παρατηρηθεί ο συγκεκριμένος φθορισμός, είναι απαραίτητο να μπλοκάρετε (ή να καταστείλετε) πίσω από τον αντικειμενικό φακό και πρέπει να χρησιμοποιούνται μαζί.
Διαφορά μεταξύ μικροσκοπίου φθορισμού και κοινού μικροσκοπίου
1. Η λειτουργία φωτισμού είναι συνήθως επεισοδιακή, δηλαδή η πηγή φωτός προβάλλεται στο δείγμα μέσω του αντικειμενικού φακού.
2. Η πηγή φωτός είναι το υπεριώδες φως με μικρό μήκος κύματος και υψηλότερη ανάλυση από το συνηθισμένο μικροσκόπιο.
3. Υπάρχουν δύο ειδικά φίλτρα, το ένα μπροστά από την πηγή φωτός χρησιμοποιείται για να φιλτράρει το ορατό φως και αυτό που βρίσκεται μεταξύ του προσοφθάλμιου φακού και του αντικειμενικού φακού χρησιμοποιείται για το φιλτράρισμα του υπεριώδους φωτός για την προστασία των ματιών των ανθρώπων.
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι επίσης ένα είδος οπτικού μικροσκοπίου, η κύρια διαφορά είναι ότι τα μήκη κύματος διέγερσής τους είναι διαφορετικά. Αυτό καθορίζει τη διαφορά μεταξύ μικροσκοπίου φθορισμού και συνηθισμένου οπτικού μικροσκοπίου στη δομή και τη χρήση.
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι το βασικό εργαλείο της κυτταροχημείας του ανοσοφθορισμού. Αποτελείται από πηγή φωτός, σύστημα πλάκας φίλτρου και οπτικό σύστημα. Χρησιμοποιεί φως με ορισμένο μήκος κύματος για να διεγείρει το δείγμα ώστε να εκπέμπει φθορισμό και το μεγεθύνει μέσω του αντικειμενικού φακού και του συστήματος προσοφθάλμιου φακού για να παρατηρήσει την εικόνα φθορισμού του δείγματος.
