Αρχές και δομικά χαρακτηριστικά του μικροσκοπίου φθορισμού
Το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιεί μια εξαιρετικά αποτελεσματική πηγή φωτός σημείων για να εκπέμπει ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός (όπως το υπεριώδες φως 3650 ή το πορφυρό μπλε φως 4200) μέσω ενός συστήματος φίλτρου χρώματος ως φωτός διέγερσης, το οποίο διεγείρει τις φθορίζουσες ουσίες στο δείγμα για να εκπέμπει διάφορα χρώματα του φθορισμού και στη συνέχεια παρατηρεί τη μεγέθυνση του αντικειμενικού φακού και του προσδιορισμού. Με αυτόν τον τρόπο, ακόμη και με αδύναμο φθορισμό σε ισχυρό υπόβαθρο, είναι εύκολο να αναγνωριστεί και έχει υψηλή ευαισθησία. Χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της κυτταρικής δομής, της λειτουργίας και της χημικής σύνθεσης. Η βασική δομή ενός μικροσκοπίου φθορισμού αποτελείται από ένα κανονικό οπτικό μικροσκόπιο και ορισμένα αξεσουάρ, όπως πηγή φωτός φθορισμού, φίλτρο διέγερσης, διαχωριστή διπλής δοκού και φίλτρο αποκλεισμού. Η πηγή φωτός φθορισμού - συνήθως χρησιμοποιεί λαμπτήρες υδραργύρου εξαιρετικά υψηλής πίεσης (50-200 W), που μπορεί να εκπέμπει φως διαφόρων μήκους κύματος, αλλά κάθε φθορίζουσα ουσία έχει μήκος κύματος διέγερσης που παράγει ισχυρό φθορισμό. Επομένως, πρέπει να προστεθούν φίλτρα διέγερσης (συνήθως υπεριώδη, μοβ, μπλε και πράσινα φίλτρα διέγερσης) για να επιτρέψει μόνο ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος του φωτός διέγερσης να διέρχεται και να ακτινοβολεί το δείγμα, απορροφώντας όλο το φως. Αφού ακτινοβολείται με φως διέγερσης, κάθε ουσία εκπέμπει ορατό φθορισμό με μήκος κύματος περισσότερο από το μήκος κύματος ακτινοβολίας σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα. Ο φθορισμός έχει εξειδίκευση και είναι γενικά ασθενέστερος από το φως διέγερσης. Προκειμένου να παρατηρηθεί ο συγκεκριμένος φθορισμός, πρέπει να προστεθεί ένα φίλτρο αποκλεισμού (ή καταστολής) πίσω από τον αντικειμενικό φακό. Οι λειτουργίες του είναι διπλές: πρώτον, να απορροφήσουν και να εμποδίσουν το φως διέγερσης από την είσοδο στο προσοφθάλμιο για να αποφευχθεί η διαταραχή του φθορισμού και η καταστροφή των ματιών. Δεύτερον, για να επιλέξετε και να επιτρέψετε να περάσει ο συγκεκριμένος φθορίζοντας, παρουσιάζοντας ένα συγκεκριμένο φθορίζον χρώμα. Δύο τύποι φίλτρων πρέπει να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό.
