Αρχές και δομικά χαρακτηριστικά της μικροσκοπίας φθορισμού
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι η χρήση υψηλής φωτεινής απόδοσης της σημειακής πηγής φωτός, μέσω του συστήματος φιλτραρίσματος χρώματος για την εκπομπή ενός συγκεκριμένου μήκους κύματος φωτός (όπως το υπεριώδες 3650 ή το ιώδες-μπλε 4200) ως φως διέγερσης, διέγερση φθορίζοντος υλικού εντός το δείγμα εκπέμπει μια ποικιλία διαφορετικών χρωμάτων φθορισμού και στη συνέχεια μεγεθύνεται μέσω του αντικειμενικού φακού και των προσοφθάλμιων φακών για παρατήρηση. Με αυτόν τον τρόπο, στο υπόβαθρο ισχυρής αντίθεσης, ακόμα κι αν ο φθορισμός είναι πολύ αδύναμος, είναι εύκολο να εντοπιστεί, υψηλής ευαισθησίας, που χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της κυτταρικής δομής και λειτουργίας και χημικής σύνθεσης. Η βασική δομή ενός μικροσκοπίου φθορισμού αποτελείται από ένα συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο συν μερικά εξαρτήματα (όπως μια πηγή φωτός φθορισμού, φίλτρα διέγερσης, διαχωριστής δέσμης διπλού χρώματος και φίλτρα μπλοκαρίσματος κ.λπ.). Πηγή φωτός φθορισμού - γενικά χρησιμοποιούμενος λαμπτήρας υδραργύρου υπερυψηλής πίεσης (50-200W), ο οποίος μπορεί να εκπέμψει διάφορα μήκη κύματος φωτός, αλλά κάθε υλικό φθορισμού έχει το ισχυρότερο μήκος κύματος διέγερσης φθορισμού, επομένως απαιτείται προσθήκη φίλτρων διέγερσης (γενικά υπεριώδες, ιώδες, μπλε και πράσινο φίλτρο διέγερσης), έτσι ώστε μόνο ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός διέγερσης μέσω της ακτινοβολίας των δειγμάτων, ενώ το άλλο φως απορροφάται. Επομένως, είναι απαραίτητο να προστεθεί ένα φίλτρο διέγερσης (συνήθως φίλτρα διέγερσης υπεριώδους, ιώδους, μπλε και πράσινου), έτσι ώστε μόνο ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός διέγερσης μέσω του δείγματος, ενώ άλλο φως απορροφάται. Όταν κάθε ουσία ακτινοβολείται με φως διέγερσης, εκπέμπει ορατό φθορισμό μεγαλύτερου μήκους κύματος από αυτόν του ακτινοβολούμενου φωτός μέσα σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα. Ο φθορισμός έχει μια ειδικότητα, γενικά πιο αδύναμη από το φως διέγερσης, προκειμένου να μπορεί να παρατηρήσει τον συγκεκριμένο φθορισμό, στον αντικειμενικό φακό πίσω από την ανάγκη προσθήκης ενός φίλτρου αποκλεισμού (ή καταστολής).
Ο ρόλος του είναι διπλός:
Το ένα είναι να απορροφήσει και να μπλοκάρει το φως διέγερσης στον προσοφθάλμιο φακό, ώστε να μην διαταραχθεί ο φθορισμός και η βλάβη των ματιών.
Το δεύτερο είναι να επιλέξετε και να αφήσετε τον συγκεκριμένο φθορισμό να περάσει, δείχνοντας ένα συγκεκριμένο φθορίζον χρώμα. Οι δύο τύποι φίλτρων πρέπει να επιλέγονται και να χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό.
