Τι είδους μικροσκόπιο χρησιμοποιείται για να δει το σχήμα των μικροβιακών κυττάρων
Ένας συλλογικός όρος για όλους τους μικροσκοπικούς οργανισμούς που είναι δύσκολο για τα άτομα να παρατηρήσουν με γυμνό μάτι. Οι μικροοργανισμοί περιλαμβάνουν βακτήρια, ιούς, μύκητες και μερικά φύκια. (Ωστόσο, ορισμένοι μικροοργανισμοί είναι ορατοί με γυμνό μάτι, όπως τα μανιτάρια που ανήκουν σε μύκητες, το Ganoderma lucidum κ.λπ.) Οι ιοί είναι ένας τύπος «μη κυτταρικών οργανισμών» που αποτελείται από λίγα συστατικά όπως νουκλεϊκά οξέα και πρωτεΐνες, αλλά Η επιβίωση πρέπει να εξαρτάται από τα ζωντανά κύτταρα. Ανάλογα με τα διαφορετικά περιβάλλοντα που υπάρχουν, μπορούν να χωριστούν σε προκαρυωτικούς μικροοργανισμούς, διαστημικούς μικροοργανισμούς, μυκητιακούς μικροοργανισμούς, μικροοργανισμούς ζύμης, θαλάσσιους μικροοργανισμούς κ.λπ.
Ο ρόλος και η βλάβη των μικροοργανισμών:
Μία από τις σημαντικότερες επιπτώσεις των μικροοργανισμών στον άνθρωπο είναι ο επιπολασμός των μολυσματικών ασθενειών. Το 50 τοις εκατό των ανθρώπινων ασθενειών προκαλούνται από ιούς. Η ιστορία των μικροβίων που προκαλούν ανθρώπινες ασθένειες είναι η ιστορία της συνεχούς πάλης των ανθρώπων μαζί τους. Οι άνθρωποι έχουν σημειώσει μεγάλη πρόοδο στην πρόληψη και τη θεραπεία ασθενειών, αλλά συνεχίζουν να εμφανίζονται νέες και επανεμφανιζόμενες μικροβιακές λοιμώξεις, όπως ένας μεγάλος αριθμός ιογενών ασθενειών που δεν διαθέτουν αποτελεσματικά θεραπευτικά φάρμακα. Ο παθογόνος μηχανισμός ορισμένων ασθενειών δεν είναι ξεκάθαρος. Η κατάχρηση μεγάλου αριθμού αντιβιοτικών ευρέος φάσματος έχει προκαλέσει ισχυρή πίεση επιλογής, προκαλώντας μετάλλαξη πολλών στελεχών, οδηγώντας στην εμφάνιση ανθεκτικότητας στα φάρμακα και απειλείται η ανθρώπινη υγεία από νέες απειλές. Ορισμένοι τμηματοποιημένοι ιοί μπορούν να μεταλλαχθούν μέσω ανασυνδυασμού ή ανακατάταξης. Το πιο χαρακτηριστικό παράδειγμα είναι ο ιός της γρίπης.
Αφού γνωρίσετε τον συγκεκριμένο ορισμό των μικροοργανισμών, ποιος τύπος μικροσκοπίου πρέπει να χρησιμοποιήσει ο πειραματιστής όταν μελετά μικροοργανισμούς για να δει και ποιο μικροσκόπιο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να δει καλύτερα και να παρατηρήσει και να αναλύσει κοινές μικροβιακές μορφές.
Η εφεύρεση του μικροσκοπίου είναι να μπορεί να βλέπει χαμογελαστά αντικείμενα που δεν φαίνονται με γυμνό μάτι. Το μέγεθος των μικροοργανισμών είναι πολύ μικρό, επομένως πρέπει να μεγεθύνονται και να παρατηρούνται με τη βοήθεια μικροσκοπίου. Επιπλέον, υπάρχουν πολλοί τύποι μικροοργανισμών, επομένως βασικά τα περισσότερα οπτικά μικροσκόπια μπορούν να παρατηρήσουν μικροοργανισμούς, το επόμενο ερώτημα είναι ποιος τύπος μικροσκοπίου πρέπει να χρησιμοποιηθεί για παρατήρηση και ανάλυση μικροοργανισμών. Τα κοινά μικροσκόπια για την παρατήρηση της μικροβιακής μορφολογίας περιλαμβάνουν βιολογικά μικροσκόπια, μικροσκόπια αντίθεσης φάσης, ανεστραμμένα μικροσκόπια, μικροσκόπια φθορισμού και ομοεστιακά μικροσκόπια. Μικροσκόπιο και ούτω καθεξής.
Τα παρακάτω περιγράφουν τα διάφορα μικροσκόπια που χρησιμοποιούνται για την παρατήρηση μικροοργανισμών:
1. Συνηθισμένο μικροσκόπιο φωτός
Ως πηγή φωτός χρησιμοποιείται φυσικό φως ή φως και το μήκος κύματος του είναι περίπου {{0}},4 μm. Η ανάλυση του μικροσκοπίου είναι το μισό του μήκους κύματος, δηλαδή 0,2 μm και η μικρότερη εικόνα που είναι ορατή με γυμνό μάτι είναι 0,2 mm. Επομένως, η χρήση ενός καθρέφτη λαδιού (εμβύθισης) για μεγέθυνση 1000 φορές μπορεί να μεγεθύνει τα σωματίδια των 0,2 μm σε 0,2 mm ορατά με γυμνό μάτι. Τα κοινά οπτικά μικροσκόπια μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την παρατήρηση βακτηρίων, ακτινομυκήτων και μυκήτων.
2. Η μικροσκοπία σκοτεινού πεδίου χρησιμοποιείται συνήθως για την παρατήρηση της μη χρωματισμένης μικροβιακής μορφολογίας και κίνησης. Αφού εγκατασταθεί ο συμπυκνωτής σκοτεινού πεδίου στο συνηθισμένο μικροσκόπιο, το φως δεν μπορεί να διεισδύσει απευθείας από τη μέση και το οπτικό πεδίο είναι σκοτεινό. Όταν το δείγμα λαμβάνει λοξό φως από την άκρη του συμπυκνωτή, μπορεί να διασκορπιστεί, έτσι ώστε να μπορούν να παρατηρηθούν φωτεινοί μικροοργανισμοί στο φόντο του σκοτεινού πεδίου, όπως βακτήρια ή σπειροχαίτες.
3. Μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης Το μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης χρησιμοποιεί το εφέ φωτός της πλάκας διαφοράς φάσης για να αλλάξει τη φάση φωτός και το πλάτος του άμεσου φωτός και να μετατρέψει τη διαφορά φάσης φωτός σε διαφορά έντασης φωτός. Κάτω από ένα μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης, όταν το φως διέρχεται από ένα μη χρωματισμένο δείγμα, η διαφορά στην φωτεινή φάση προκαλείται από την ασυνέπεια της πυκνότητας των διαφορετικών τμημάτων του δείγματος και μπορεί να παρατηρηθεί η μορφολογία, η εσωτερική δομή και ο τρόπος κίνησης των μικροοργανισμών.
4. Μικροσκόπιο φθορισμού Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι βασικά το ίδιο με το συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο, η κύρια διαφορά είναι η πηγή φωτός, το φίλτρο και ο συμπυκνωτής. Προς το παρόν, τα περισσότερα από αυτά χρησιμοποιούν συσκευές epi-light και λαμπτήρες υδραργύρου υψηλής πίεσης χρησιμοποιούνται συνήθως ως πηγές φωτός, οι οποίες μπορούν να εκπέμπουν υπεριώδες ή μπλε-ιώδες φως. Υπάρχουν δύο είδη φίλτρων: φίλτρο διέγερσης και φίλτρο απορρόφησης. Εκτός από τους γενικούς συμπυκνωτές φωτεινού πεδίου, οι συμπυκνωτές σκοτεινού πεδίου μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν σε μικροσκόπια φθορισμού χρησιμοποιώντας μπλε φως για να ενισχύσουν την αντίθεση μεταξύ φθορισμού και φόντου. Αυτή η μέθοδος είναι εφαρμόσιμη για την ανίχνευση ή την ταυτοποίηση βακτηρίων που έχουν χρωματιστεί με φθορίζουσες χρωστικές ή σε συνδυασμό με φθορίζοντα αντισώματα.
5. Τα ηλεκτρονικά μικροσκόπια χρησιμοποιούν τη ροή ηλεκτρονίων ως πηγή φωτός. Σε σύγκριση με το ορατό φως, το μήκος κύματος είναι δεκάδες χιλιάδες φορές διαφορετικό, γεγονός που βελτιώνει σημαντικά την ανάλυση. Το μαγνητικό πηνίο χρησιμοποιείται ως σύστημα οπτικής ενίσχυσης και η μεγέθυνση μπορεί να φτάσει δεκάδες χιλιάδες ή εκατοντάδες χιλιάδες φορές. Συχνά χρησιμοποιείται σε σωματίδια ιού. και την παρατήρηση της βακτηριακής υπερδομής.
Παρατήρηση μη χρωματισμένων μικροβιακών δειγμάτων:
Τα μη χρωματισμένα δείγματα μπορούν γενικά να χρησιμοποιηθούν για την παρατήρηση βακτηριακής μορφολογίας, ισχύος και κίνησης. Τα βακτήρια είναι άχρωμα και διαφανή όταν δεν χρωματίζονται και παρατηρούνται στο μικροσκόπιο κυρίως από τη διαφορά μεταξύ του δείκτη διάθλασης των βακτηρίων και του περιβάλλοντος περιβάλλοντος. Τα βακτήρια με μαστίγια κινούνται έντονα, ενώ τα βακτήρια χωρίς μαστίγια εμφανίζουν ακανόνιστη κίνηση Brown. Τα βιώσιμα βακτήρια όπως το Treponema pallidum, το Leptospira και το Campylobacter έχουν χαρακτηριστικά σχήματα και μοτίβα κίνησης, τα οποία έχουν διαγνωστική σημασία. Οι συνήθεις μέθοδοι που χρησιμοποιούνται είναι η μέθοδος πτώσης πίεσης, η μέθοδος πτώσης κρεμαστό και η τριχοειδής μέθοδος.
1. Μέθοδος κρεμάμενης σταγόνας Εφαρμόστε βαζελίνη γύρω από την κοίλη οπή της καθαρής κοίλης γυάλινης πλάκας, πάρτε ένα δακτύλιο βακτηριακού εναιωρήματος με βρόχο εμβολιασμού και βάλτε το στο κέντρο του γυαλιού καλύμματος και, στη συνέχεια, ευθυγραμμίστε την κοίλη οπή της κοίλης γυάλινης πλάκας με το σταγονίδιο στο κέντρο του γυαλιού του καλύμματος και τοποθετήστε το κάλυμμα, στη συνέχεια αναποδογυρίστε το γρήγορα, πιέστε ελαφρά την ολίσθηση του καλύμματος για να κολλήσει σφιχτά στη βαζελίνη στην άκρη της κοίλης οπής και, στη συνέχεια, παρατηρήστε κάτω από μια υψηλή ισχύ μικροσκόπιο (ή σκοτεινό πεδίο).
2. Πάρτε έναν δακτύλιο βακτηριακού εναιωρήματος με βρόχο εμβολιασμού και τοποθετήστε τον στο κέντρο μιας καθαρής γυάλινης πλάκας με τη μέθοδο πτώσης πίεσης και καλύψτε απαλά το βακτηριακό εναιώρημα με ένα γυαλί κάλυψης, φροντίζοντας να αποφύγετε τη δημιουργία φυσαλίδων αέρα και να αποτρέψετε το βακτηριακό εναιώρημα από την υπερχείλιση. Παρατήρηση Brightfield (ή darkfield) κάτω από φακό υψηλής ισχύος.
3. Η τριχοειδής μέθοδος χρησιμοποιείται κυρίως για την εξέταση της κινητικής των αναερόβιων βακτηρίων. Συνήθως επιλέγετε μήκος 60~70mm. Αφού διοχετεύσετε το εναιώρημα των αναερόβιων βακτηρίων μέσω ενός τριχοειδούς με άνοιγμα 0,5-1,0 mm, σφραγίστε τα δύο άκρα του τριχοειδούς με φλόγα. Το τριχοειδές στερεώθηκε στη γυάλινη πλάκα με πλαστικό χαρτί και παρατηρήθηκε κάτω από φακό υψηλής ισχύος σε σκοτεινό πεδίο.
Παρατήρηση χρωματισμένων μικροβιακών δειγμάτων με μικροσκόπιο:
Μετά τη χρώση του βακτηριακού δείγματος, λόγω της έντονης αντίθεσης στο χρώμα μεταξύ των βακτηρίων και του περιβάλλοντος περιβάλλοντος, τα μορφολογικά χαρακτηριστικά των βακτηρίων (όπως το μέγεθος, το σχήμα, η διάταξη κ.λπ.) των βακτηρίων και ορισμένες ειδικές δομές μπορούν να παρατηρούνται σαφώς κάτω από ένα συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο (όπως κάψουλες, μαστίγια, σπόρια, κ.λπ.), και τα βακτήρια μπορούν να ταξινομηθούν και να αναγνωριστούν ανάλογα με την αντιδραστικότητα χρώσης.
(1) Γενική διαδικασία βακτηριακής χρώσης Η γενική διαδικασία βακτηριακής χρώσης είναι: επίχρισμα (ξήρανση) — στερέωση — χρώση.
1. Επιχρίσματα Προετοιμασία αίματος, εκκρίσεων, εκκρίσεων, υγρού παρακέντησης και υγρής καλλιέργειας και απευθείας επιχρίσματα λεπτής μεμβράνης σε γυάλινες πλάκες. αυτοψία ή μολυσμένους ζωικούς ιστούς, αλείψτε τη βλάβη με βαμβάκι για δειγματοληψία. Για την προετοιμασία βακτηριακών αποικιών ή χλοοτάπητα σε στερεό μέσο, χρησιμοποιήστε πρώτα έναν βρόχο εμβολιασμού για να πάρετε έναν δακτύλιο φυσιολογικού ορού και να τον βάλετε στο κέντρο της αντικειμενοφόρου πλάκας, στη συνέχεια χρησιμοποιήστε έναν αποστειρωμένο βρόχο εμβολιασμού για να πάρετε μια μικρή ποσότητα καλλιέργειας και να την αλέσετε ομοιόμορφα σε φυσιολογικό ορό και απλώστε το σε 1cm2 μεγάλες ή μικρές βαμμένες επιφάνειες, αφήστε το να στεγνώσει φυσικά σε θερμοκρασία δωματίου ή να στεγνώσει αργά σε απόσταση.
2. Ο σκοπός της στερέωσης είναι να σκοτώσει τα βακτήρια, να πήξει τη βακτηριακή πρωτεΐνη και τη δομή και να διευκολύνει τη χρώση. προωθήστε τα βακτήρια να προσκολληθούν στην αντικειμενοφόρο πλάκα για να αποφύγετε την έκπλυση από το νερό κατά το πλύσιμο. αλλαγή της διαπερατότητας των βακτηρίων σε βαφές, κάτι που είναι ευεργετικό για τη δομή των βακτηριακών κυττάρων της χρώσης. Συνήθως στερεώνεται με θέρμανση με φλόγα και το αποξηραμένο επίχρισμα περνά γρήγορα από τη φλόγα για 3 φορές. Είναι προτιμότερο να μην καίγεται το δέρμα στο πίσω μέρος του χεριού όταν αγγίζει την τσουλήθρα.
3. Βαφή Σύμφωνα με διαφορετικούς σκοπούς επιθεώρησης, επιλέξτε διαφορετικές μεθόδους βαφής για τη βαφή. Κατά τη βαφή, προσθέστε το διάλυμα βαφής στάγδην για να αυξήσετε την κάλυψη.
4. Mordant Οποιαδήποτε ουσία μπορεί να ενισχύσει τη συγγένεια μεταξύ της χρωστικής και του βαμμένου αντικειμένου, να στερεώσει τη βαφή στο βαμμένο αντικείμενο και να προκαλέσει αλλαγή στη διαπερατότητα της κυτταρικής μεμβράνης ονομάζεται άρωμα. Συνήθως χρησιμοποιούνται στυπτηρία, ταννικό οξύ, άλατα μετάλλων και ιώδιο κ.λπ., ενώ η θέρμανση χρησιμοποιείται επίσης για την προώθηση του χρωματισμού. Τα μυρωδικά μπορούν να χρησιμοποιηθούν μεταξύ πρωτογενούς χρώσης και αντιχρώσης και μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν μετά τη στερέωση ή να περιέχονται σε σταθεροποιητικό και χρώση.
5. Αποχρωματισμός Κάθε χημικός παράγοντας που μπορεί να αφαιρέσει το χρώμα του βαμμένου αντικειμένου ονομάζεται αποχρωματιστής. Ως αποχρωματιστές χρησιμοποιούνται συνήθως αιθανόλη, ακετόνη κ.λπ. Ο αποχρωματιστικός παράγοντας μπορεί να ανιχνεύσει τον βαθμό σταθερότητας του συνδυασμού βακτηρίων και βαφών, ο οποίος μπορεί να χρησιμοποιηθεί για διαφορική χρώση.
6. Αντιχρώση Τα βακτήρια ή οι δομές τους που έχουν αποχρωματιστεί συχνά αντιχρωματίζονται με ένα διάλυμα αντιχρώσης για εύκολη παρατήρηση. Το χρώμα του διαλύματος αντιχρώσης είναι διαφορετικό από αυτό του πρωτογενούς διαλύματος βαφής για να σχηματιστεί μια έντονη αντίθεση. Η αντιχρώση δεν πρέπει να είναι πολύ δυνατή, ώστε να μην καλύπτεται το χρώμα της αρχικής χρώσης.
