Προσδιορισμός μικροβιακού πληθυσμού - μέθοδος άμεσης μικροσκοπικής μέτρησης!
I. Απαιτήσεις Σκοπού
1, Για να διευκρινιστεί η αρχή της μέτρησης των πλακών αιματοκρίτη.
2, Κατακτήστε τη μέθοδο μικροβιακής μέτρησης χρησιμοποιώντας πλάκα αιματοκρίτη.
II. Βασικές αρχές
Η μέθοδος άμεσης μέτρησης μικροσκοπίου είναι μια μικρή ποσότητα αιωρήματος του δείγματος που πρόκειται να δοκιμαστεί σε μια ειδική αντικειμενοφόρο πλάκα με καθορισμένη περιοχή και όγκο (γνωστό και ως βακτηριολογικός μετρητής), στο μικροσκόπιο που μετρά απευθείας μια απλή, γρήγορη, διαισθητική μέθοδο. Επί του παρόντος, οι εγχώριοι και ξένοι συνήθως χρησιμοποιούμενοι βακτηριολογικοί μετρητές είναι: η πλάκα μέτρησης αιμοσφαιρίων, οι βακτηριολογικοί μετρητές Peteroff-Hauser και οι βακτηριολογικοί μετρητές Hawksley κ.λπ., οι οποίοι μπορούν να χρησιμοποιηθούν για μαγιά, βακτήρια, σπόρια μούχλας και άλλα εναιωρήματα μέτρησης, η βασική αρχή είναι το ίδιο. Οι δύο τελευταίοι τύποι μετρητών έχουν συνολικό όγκο 0.02 mm3 μετά την τοποθέτηση της καλυπτρίδας και η απόσταση μεταξύ της καλυπτρίδας και της τομής φορέα είναι μόνο 0,02 mm, επομένως μικρότερα κελιά π.χ. τα βακτήρια μπορούν να παρατηρηθούν και να μετρηθούν με στόχο εμβάπτισης λαδιού. Εκτός από τη χρήση αυτών των μετρητών, υπάρχει επίσης μια μέθοδος εκτίμησης της αναλογίας της περιοχής επιχρίσματος προς την περιοχή οπτικού πεδίου που παρατηρείται απευθείας στο μικροσκόπιο, η οποία χρησιμοποιείται γενικά για τη βακτηριολογική εξέταση του αγελαδινού γάλακτος. Τα πλεονεκτήματα της άμεσης μεθόδου μέτρησης μικροσκοπίου είναι διαισθητικά, γρήγορα και εύκολα στη χρήση. Ωστόσο, το μειονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι ότι το αποτέλεσμα είναι συνήθως το άθροισμα νεκρών και ζωντανών οργανισμών. Υπάρχουν ορισμένες μέθοδοι για να ξεπεραστεί αυτό το μειονέκτημα, όπως ο συνδυασμός καλλιέργειας μικροθαλάμου με χρώση ζωντανών βακτηρίων (σύντομο χρονικό διάστημα) και η προσθήκη αναστολέων κυτταροκίνησης για να επιτευχθεί ο σκοπός της μέτρησης μόνο ζωντανών οργανισμών.
Βήματα λειτουργίας
1, Βακτηριακή προετοιμασία εναιωρήματος
Χρησιμοποιήστε στείρο φυσιολογικό ορό για να φτιάξετε βακτηριακό εναιώρημα μαγιάς μπύρας με κατάλληλη συγκέντρωση.
2, Θάλαμος μέτρησης καθρέφτη
Πριν από την προσθήκη δειγμάτων, θα πρέπει πρώτα να επιθεωρηθεί ο θάλαμος μέτρησης της πλάκας μέτρησης. Εάν υπάρχει βρωμιά, πρέπει να καθαριστεί και να στεγνώσει με πιστολάκι πριν από την καταμέτρηση.
3, Προσθήκη δειγμάτων
Καθαρίστε και στεγνώστε την πλάκα μέτρησης αιμοσφαιρίων καλυμμένη με καλυπτρίδα και, στη συνέχεια, χρησιμοποιήστε μια αποστειρωμένη τριχοειδική προχοΐδα για να ανακινήσετε το εναιώρημα μαγιάς μπύρας από την άκρη της καλυπτρίδας για να ρίξει μια μικρή σταγόνα, έτσι ώστε το βακτηριακό υγρό κατά μήκος του κενού μέσω τριχοειδούς διείσδυσης στο ο θάλαμος μέτρησης αυτόματα, γενικά ο θάλαμος μέτρησης μπορεί να γεμίσει με βακτηριακό υγρό. Κατά τη λήψη δειγμάτων, το βακτηριακό διάλυμα πρέπει πρώτα να ανακινείται καλά. κατά την προσθήκη δειγμάτων, ο θάλαμος μέτρησης δεν πρέπει να έχει φυσαλίδες αέρα.
4, Καταμέτρηση μικροσκοπίου
Αφού προσθέσετε το δείγμα, αφήστε το να ξεκουραστεί για 5 λεπτά, στη συνέχεια τοποθετήστε την πλάκα μέτρησης αιμοσφαιρίων στη βαθμίδα φορέα του μικροσκοπίου, βρείτε πρώτα τη θέση του θαλάμου μέτρησης με χαμηλή μεγέθυνση και μετά αλλάξτε την σε υψηλή μεγέθυνση για μέτρηση. Ρυθμίστε την ένταση του φωτός του μικροσκοπίου κατάλληλα, γιατί το μικροσκόπιο με ανακλαστήρα θα πρέπει επίσης να προσέξει ότι το φως δεν πρέπει να είναι προκατειλημμένο προς τη μία πλευρά, διαφορετικά το οπτικό πεδίο δεν είναι εύκολο να ξεκαθαρίσει τη γραμμή του πλέγματος του θαλάμου μέτρησης, ή δείτε μόνο την κάθετη γραμμή ή δείτε μόνο την οριζόντια γραμμή. Εάν το βακτηριακό υγρό διαπιστωθεί ότι είναι πολύ παχύ ή πολύ λεπτό πριν από την καταμέτρηση, είναι απαραίτητο να ρυθμίσετε εκ νέου την αραίωση πριν από την καταμέτρηση. Οι γενικές απαιτήσεις αραίωσης δείγματος για περίπου 5 έως 10 βακτήρια σε κάθε κύτταρο είναι κατάλληλες. Για κάθε θάλαμο μέτρησης, επιλέγονται για μέτρηση οι οργανισμοί σε 5 μεσαία διαμερίσματα (4 γωνίες και ένα μεσαίο διαμέρισμα στο κέντρο). Οι οργανισμοί που βρίσκονται στις γραμμές του πλέγματος υπολογίζονται συνήθως μόνο στην επάνω και στη δεξιά γραμμή. Στην περίπτωση της εκβλάστησης ζυμομύκητα, όταν το σώμα που εκκολάπτει φτάσει στο μισό μέγεθος του μητρικού κυττάρου, υπολογίζεται ως δύο οργανισμοί. Μετρώντας ένα δείγμα από τους δύο θαλάμους μέτρησης στη μέση τιμή για τον υπολογισμό της περιεκτικότητας σε βακτήρια του δείγματος.
5. Καθαρισμός της πλάκας αιματοκρίτη
Μετά τη χρήση, ξεπλύνετε την πλάκα μέτρησης αιμοσφαιρίων με νερό κάτω από τη βρύση, μην χρησιμοποιείτε σκληρά αντικείμενα για πλύσιμο και βούρτσισμα, στεγνώστε την μόνοι σας ή χρησιμοποιήστε πιστολάκι μαλλιών για να τη στεγνώσετε μετά το πλύσιμο. Επιθεωρήστε μικροσκοπικά την πλάκα για να δείτε εάν υπάρχουν υπολειμματικοί οργανισμοί ή άλλα ιζήματα σε κάθε διαμέρισμα. Εάν δεν είναι καθαρό, το πλύσιμο πρέπει να επαναληφθεί μέχρι να είναι καθαρό.
