Μέτρηση όγκου μπλοκ ιστού με χρήση βιολογικών μικροσκοπίων
Μέχρι στιγμής, η κρυοκαθήλωση, η κατεψυγμένη υπερ-λεπτή τομή και η λυοφιλοποίηση-είναι συνήθεις μέθοδοι για τη μικροσκοπία με ακτίνες Χ-ιστών και κυττάρων. Δώστε τις ακόλουθες λεπτομέρειες σχετικά με αυτήν τη μέθοδο:
Ένα βιολογικό μικροσκόπιο με προβολέα μπορεί να μετακινήσει τον προβολέα πάνω και κάτω για να επιτύχει μέτρια φωτεινότητα και το διάφραγμα του μεταβλητού διαφράγματος μπορεί επίσης να αλλάξει για να επιτευχθεί μέτρια φωτεινότητα. Εάν το φως προέρχεται από τον ήλιο, ο προβολέας μπορεί να ανυψωθεί κατάλληλα και το διάφραγμα του μεταβλητού φωτός μπορεί να μεγεθυνθεί κατάλληλα. Εάν το φως είναι πολύ δυνατό, ο προβολέας μπορεί να χαμηλώσει κατάλληλα και το άνοιγμα της τομής μπορεί να μειωθεί κατάλληλα. Εάν εξακολουθείτε να αισθάνεστε εκθαμβωτικοί σε αυτήν την κατάσταση, μπορείτε να επιλέξετε να τοποθετήσετε ένα κατάλληλο φίλτρο στο στήριγμα κάτω από τα φώτα της δημοσιότητας. Αυτή η βελανιδιά μπορεί να πετύχει μια φωτεινότητα που σας ικανοποιεί. Φυσικά, η προσαρμογή της επάνω και της κάτω θέσης του προβολέα μπορεί να αλλάξει το μέγεθος του διαφράγματος της ένδειξης φωτός και να επιλέξει κατάλληλα φίλτρα, κάτι που απαιτεί μια συγκεκριμένη περίοδο εξάσκησης και εμπειρίας.
Ένα πολύ σημαντικό ζήτημα στη βιολογική μικροσκοπία είναι η διαδικασία δειγματοληψίας και απομόνωσης κυττάρων. Μετά την κατάψυξη-ξήρανση και την ενσωμάτωση ρητίνης (FD), τα κατεψυγμένα εξαιρετικά λεπτά τμήματα πρέπει να υποβληθούν σε προσεκτική επεξεργασία για να διασφαλιστεί ότι το περιεχόμενο των 65 στοιχείων κάθε τμήματος δεν θα καταστραφεί κατά την παρατήρηση και την ανάλυση. Λόγω των πολυάριθμων βημάτων και του υψηλού κόστους που συνεπάγεται η μικροανάλυση ακτίνων Χ, είναι λυπηρό να συνάγουμε λανθασμένα συμπεράσματα εάν τα κύτταρα που αναλύθηκαν είναι κατεστραμμένα ή νεκρά μετά από παρατεταμένη και πολυ-επεξεργασία. Τα κύτταρα του μυοκαρδίου που διαχωρίζονται με θεραπεία ζελατινάσης έχουν δύο μορφές, η μία έχει σχήμα μακράς ράβδου-και η άλλη κυκλική. Το τελευταίο αναφέρεται σε κύτταρα που πεθαίνουν που έχουν υποστεί βλάβη κατά τη διαδικασία του κυτταρικού διαχωρισμού.
Η περιεκτικότητα και η κατανομή των ηλεκτρολυτών σε αυτούς τους δύο τύπους κυττάρων είναι πολύ διαφορετική σε ένα βιολογικό μικροσκόπιο. Το Na είναι πολύ υψηλό και το K είναι εξαιρετικά χαμηλό στα κυκλικά καρδιομυοκύτταρα και η συγκέντρωση του Ca στους γραμμικούς δενδρίτες είναι πολύ υψηλή. Μετά από επαλήθευση με άλλες αναλυτικές μεθόδους, έχει αποδειχθεί ότι το υψηλό Na και το χαμηλό K στα κυκλικά κύτταρα και το υψηλό Ca στα μιτοχόνδρια είναι αποτέλεσμα βλάβης της μεμβράνης κατά τον κυτταρικό διαχωρισμό. Η μέθοδος ψυχρής στερέωσης για κύτταρα και ιστούς συχνά περιλαμβάνει πρώτα την απόσβεση και στη συνέχεια την αποθήκευση τους σε υγρό άζωτο. Η σταθεροποίηση απόσβεσης είναι ζωτικής σημασίας για το αποτέλεσμα διατήρησης. Τα ζωντανά κύτταρα ή οι φρέσκοι ιστοί είναι πλούσιοι σε νερό και όταν σβήνουν, τα μέρη των κυττάρων ή οι ιστοί που έρχονται σε άμεση επαφή με το ψυκτικό (ειδικά όταν χρησιμοποιείται υγρό άζωτο για ψύξη) συχνά καταψύχονται και στερεώνονται πρώτα, σχηματίζοντας ένα «κέλυφος» που εμποδίζει το κεντρικό τμήμα των κυττάρων να συνθλιβεί και να στερεώνεται. Επομένως, κατά τη διεξαγωγή μικροανάλυσης ακτίνων Χ, συχνά διαπιστώνεται ότι κρύσταλλοι πάγου υπάρχουν στο κεντρικό τμήμα μεγαλύτερων κυττάρων. Για να μην συμβεί αυτή η κατάσταση, μια ουσία με σημείο τήξης υψηλότερο από το υγρό άζωτο αλλά χαμηλότερο κατά 806c χρησιμοποιείται ως ψυκτικό μέσο. Υπάρχουν πολλές από αυτές τις ουσίες, αλλά είναι εύκολο να αποκτηθούν και το πιο προσιτό είναι το συμπυκνωμένο προπάνιο (σημείο βρασμού 42.120c, σημείο τήξης 187.10c, μοριακό βάρος 44.1), το οποίο έχει επίσης γρήγορο ρυθμό ψύξης. Το μειονέκτημά του όμως είναι ότι είναι εύφλεκτο.
