Προετοιμασία και Παρατήρηση Βιολογικών Δειγμάτων για Ηλεκτρονικά Μικροσκόπια
Η ανάλυση ενός μικροσκοπίου εξαρτάται από το μήκος κύματος του φωτός που χρησιμοποιείται. Το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, που εμφανίστηκε το 1933, πέτυχε σημαντικά υψηλότερη ανάλυση από ένα οπτικό μικροσκόπιο λόγω της χρήσης δεσμών ηλεκτρονίων με μήκη κύματος πολύ μικρότερα από το ορατό φως ως πηγές φωτός. Οι διαφορετικές πηγές φωτός καθορίζουν επίσης μια σειρά διαφορών μεταξύ των ηλεκτρονικών μικροσκοπίων και των οπτικών μικροσκοπίων.
Με βάση τις διαφορές στις αρχές της απεικόνισης με δέσμη ηλεκτρονίων και τους τρόπους με τους οποίους δρουν στα δείγματα, τα σύγχρονα ηλεκτρονικά μικροσκόπια έχουν εξελιχθεί σε πολλούς τύπους. Επί του παρόντος, τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα είναι τα ηλεκτρονικά μικροσκόπια μετάδοσης και τα ηλεκτρονικά μικροσκόπια σάρωσης. Το πρώτο έχει συνολική μεγέθυνση που μπορεί να κυμαίνεται μεταξύ 1000-10000000 φορές, ενώ το δεύτερο έχει συνολική μεγέθυνση που μπορεί να κυμαίνεται μεταξύ 20-3000000 φορές. Αυτό το πείραμα εισάγει κυρίως την προετοιμασία δύο τύπων δειγμάτων μικροσκοπίου, της ηλεκτρονικής μικροσκοπίας μετάδοσης και της ηλεκτρονικής μικροσκοπίας σάρωσης.
2, Εξοπλισμός
1. Το στέλεχος Escherichia coli είναι κεκλιμένο.
2. Διάλυμα ή αντιδραστήριο: οξικός πεντυλεστέρας, συμπυκνωμένο θειικό οξύ, άνυδρη αιθανόλη, στείρο νερό, υδατικό διάλυμα φωσφοβολφραμικού νατρίου 2% (pH 6,5-8,0), 0,3% πολυβινυλοφορμαλδεΰδη (διαλυμένο σε χλωροφορμικό αμινοχλωροαμινο, ακετοκυτταρικό διάλυμα), pBR322.
3. Τα όργανα ή άλλα εργαλεία περιλαμβάνουν συνηθισμένα οπτικά μικροσκόπια, χάλκινα δίχτυα, χοάνες πορσελάνης, ποτήρια ζέσεως, πιάτα Petri, αποστειρωμένα σταγονομετρικά, αποστειρωμένα τσιμπιδάκια, καρφίτσες, γυάλινες πλάκες, πλάκες μέτρησης, μηχανές επίστρωσης κενού, στεγνωτήρια κρίσιμων σημείων κ.λπ.
3, Βήματα λειτουργίας
(1) Προετοιμασία και Παρατήρηση Δειγμάτων για Ηλεκτρονική Μικροσκοπία Μετάδοσης
1. Επεξεργασία μεταλλικού πλέγματος
Το δείγμα ενός οπτικού μικροσκοπίου τοποθετείται σε γυάλινη πλάκα για παρατήρηση. Ωστόσο, σε έναν καθρέφτη μετάδοσης, καθώς τα ηλεκτρόνια δεν μπορούν να διαπεράσουν το γυάλινο φύλλο, ένα υλικό πλέγματος μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο ως φορέας, που συνήθως αναφέρεται ως φέρον πλέγμα. Το πλέγμα μεταφοράς μπορεί να χωριστεί σε διάφορες προδιαγραφές λόγω διαφορετικών υλικών και σχημάτων, μεταξύ των οποίων χρησιμοποιείται συνήθως χάλκινο πλέγμα με 200-400 mesh (αριθμός οπών). Το χάλκινο πλέγμα πρέπει να υποβληθεί σε επεξεργασία πριν από τη χρήση για να αφαιρεθεί τυχόν βρωμιά και να διατηρηθεί καθαρό, διαφορετικά θα επηρεάσει την ποιότητα του φιλμ στήριξης και τη διαύγεια των φωτογραφιών του δείγματος. Το πλέγμα χαλκού 400 mesh που χρησιμοποιήθηκε σε αυτό το πείραμα μπορεί να επεξεργαστεί με την ακόλουθη μέθοδο: πρώτα, εμποτίστε και επιπλώστε με οξικό πεντυλεστέρα για μερικές ώρες, στη συνέχεια ξεπλύνετε πολλές φορές με απεσταγμένο νερό και τέλος βυθίστε και επιπλώστε το πλέγμα χαλκού σε άνυδρη αιθανόλη για αφυδάτωση. Εάν το πλέγμα χαλκού εξακολουθεί να μην είναι καθαρό μετά τις παραπάνω μεθόδους, μπορεί να εμποτιστεί σε αραιωμένο πυκνό θειικό οξύ (1:1) για 1-2 λεπτά ή να βράσει σε διάλυμα NaOH 1% για λίγα λεπτά, να ξεπλυθεί αρκετές φορές με απεσταγμένο νερό και στη συνέχεια να αφυδατωθεί σε άνυδρη αιθανόλη για μελλοντική χρήση.
