Απαιτήσεις για την προετοιμασία δειγμάτων ρουτίνας για μικροσκοπία
Το ομοεστιακό μικροσκόπιο είναι ένα νέο προϊόν υψηλής τεχνολογίας εποχής που αναπτύχθηκε τη δεκαετία του 1980 και είναι ένα από τα σημαντικά αναλυτικά όργανα στη μοριακή βιολογία και την επιστήμη της ζωής σήμερα. Η ομοεστιακή μικροσκοπία βασίζεται σε απεικόνιση μικροσκοπίου φθορισμού με προστιθέμενη συσκευή σάρωσης λέιζερ, χρησιμοποιώντας υπολογιστή για επεξεργασία εικόνας για τη λήψη φθοριζόμενων εικόνων της μικροδομής μέσα στα κύτταρα ή τους ιστούς και για την παρατήρηση αλλαγών στη μορφολογία πολλών μηχανών φυσιολογικού σήματος σε υποκυτταρικό επίπεδο. Γίνετε ένα ισχυρό εργαλείο έρευνας στους τομείς της μορφολογίας, της μοριακής κυτταρικής βιολογίας, της νευροεπιστήμης, της φαρμακολογίας, της γενετικής και άλλων επιστημονικών πεδίων.
Η προετοιμασία του δείγματος για ομοεστιακή μικροσκοπία είναι ένα κρίσιμο βήμα πριν από την ανίχνευση. Τα δείγματα πρέπει να φέρουν ετικέτα με φθορίζοντες ανιχνευτές (μονοί, διπλοί, τριπλοί).
ο
Τα δείγματα μπορεί να είναι σταθεροί ή ζωντανοί ιστοί, ή σταθερές ή ζωντανές προσκολλημένες καλλιέργειες. Τα κύτταρα πρέπει να καλλιεργούνται σε ειδικά μικρά πιάτα καλλιέργειας ή καλυπτρίδες Confocal. Αναρτήστε τα κύτταρα, ανακινήστε ή ρίξτε τις φέτες και καλύψτε με καλυπτρίδες με φιλμ κάλυψης. Το πάχος Zda του δείγματος είναι περίπου 1~2 mm, το πάχος του γυαλιού καλύμματος που χρησιμοποιείται πρέπει να είναι μικρότερο από 0,17 mm και το πάχος του γυαλιού ολίσθησης πρέπει να είναι μεταξύ 0.8~1,2 mm, και η επιφάνεια είναι λεία, το πάχος είναι ομοιόμορφο και δεν υπάρχει εμφανής φθορισμός παρεμβολής. Το μέσο στερέωσης χρησιμοποιείται συχνά για σταθερά δείγματα και η γλυκερίνη που παρασκευάζεται σε PBS με pH 8.5-9 χρησιμοποιείται συνήθως για τη συναρμολόγηση.
Απαιτήσεις ρουτίνας προετοιμασίας δειγμάτων:
1. Επιλογή βαφών
Δεδομένου ότι το ομοεστιακό μικροσκόπιο χρησιμοποιεί ένα λέιζερ μονού μήκους κύματος ως πηγή φωτός, η επιλογή των φθοριζόντων βαφών θα πρέπει να βασίζεται στο μήκος κύματος του λέιζερ που είναι εξοπλισμένο με το ομοεστιακό μικροσκόπιο. Εάν υπάρχουν πολλές φθορίζουσες βαφές στο ίδιο δείγμα, το μήκος κύματος εκπομπής τους θα πρέπει επίσης να λαμβάνεται υπόψη όσο το δυνατόν περισσότερο. Μην επικαλύπτετε για να αποφύγετε προβλήματα σταυροχρωμίας.
2. Επιλογή φορέα δείγματος
Γενικά, ο αντικειμενικός φακός υψηλής ισχύος του ομοεστιακού μικροσκοπίου είναι φακός λαδιού, το αριθμητικό του διάφραγμα είναι μικρό και η απόσταση εργασίας μεταξύ του φακού και του δείγματος απαιτείται να μην είναι μεγαλύτερη από 0,17 mm. Οι διαφάνειες και οι καλυπτρίδες είναι μια χαρά. Εάν πρόκειται για αιωρούμενα κύτταρα ή αιωρούμενα σωματίδια, μπορεί να χρησιμοποιηθεί ένα τρυβλίο Petri αφιερωμένο σε ομοεστιακό μικροσκόπιο για τη μεταφορά του δείγματος για παρατήρηση.
3. Επιλογή μέσου στερέωσης
Εάν το δείγμα χρειάζεται να παρατηρηθεί μόνο μία φορά και ο φθορισμός δεν σβήνει εύκολα, μπορείτε να επιλέξετε μια ορισμένη συγκέντρωση μίγματος γλυκερόλης για να σφραγίσει την αντικειμενοφόρο πλάκα. Εάν το δείγμα πρέπει να τοποθετηθεί για ένα χρονικό διάστημα και να ληφθεί πολλές φορές, θα πρέπει να επιλεγεί ένα μέσο στερέωσης σβέσης κατά του φθορισμού για να μειωθεί η απώλεια σημάτων φθορισμού.
