Οι αρχές και τα δομικά χαρακτηριστικά των μικροσκοπίων φθορισμού
Το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιεί μια εξαιρετικά αποτελεσματική σημειακή πηγή φωτός για να εκπέμπει ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός (όπως το υπεριώδες φως 3650 ή το μωβ μπλε φως 4200) μέσω ενός συστήματος έγχρωμου φίλτρου ως φως διέγερσης, το οποίο διεγείρει τις φθορίζουσες ουσίες στο δείγμα για να εκπέμψει διάφορα χρώματα του φθορισμού και στη συνέχεια με την παρατήρηση του φθορισμού. Με αυτόν τον τρόπο, ακόμη και με ασθενή φθορισμό σε έντονο φόντο, είναι εύκολο να αναγνωριστεί και έχει υψηλή ευαισθησία. Χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της κυτταρικής δομής, λειτουργίας και χημικής σύνθεσης. Η βασική δομή ενός μικροσκοπίου φθορισμού αποτελείται από ένα κανονικό οπτικό μικροσκόπιο και ορισμένα εξαρτήματα όπως μια πηγή φωτός φθορισμού, φίλτρο διέγερσης, διαχωριστής δέσμης διπλού χρώματος και φίλτρο μπλοκαρίσματος. Η πηγή φωτός φθορισμού - χρησιμοποιεί συνήθως υπερ-λαμπτήρες υδραργύρου υψηλής πίεσης (50-200W), οι οποίοι μπορούν να εκπέμπουν φως διαφόρων μηκών κύματος, αλλά κάθε φθορίζουσα ουσία έχει ένα μήκος κύματος φωτός διέγερσης που παράγει τον ισχυρότερο φθορισμό. Επομένως, πρέπει να προστεθούν φίλτρα διέγερσης (συνήθως υπεριώδες, μωβ, μπλε και πράσινα φίλτρα διέγερσης) για να επιτρέπεται μόνο ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος φωτός διέγερσης να περάσει και να ακτινοβολήσει το δείγμα, ενώ απορροφά όλο το άλλο φως. Αφού ακτινοβοληθεί με φως διέγερσης, κάθε ουσία εκπέμπει ορατό φθορισμό με μήκος κύματος μεγαλύτερο από το μήκος κύματος της ακτινοβολίας σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα. Ο φθορισμός έχει ειδικότητα και είναι γενικά πιο αδύναμος από το φως διέγερσης. Προκειμένου να παρατηρηθεί συγκεκριμένος φθορισμός, πρέπει να προστεθεί ένα φίλτρο αποκλεισμού (ή καταστολής) πίσω από τον αντικειμενικό φακό.
Οι λειτουργίες του είναι διπλές: πρώτον, να απορροφά και να εμποδίζει το φως διέγερσης να εισέλθει στον προσοφθάλμιο φακό για να αποφευχθεί η διαταραχή του φθορισμού και η καταστροφή των ματιών. δεύτερον, να επιλέξει και να αφήσει να περάσει συγκεκριμένος φθορισμός, εμφανίζοντας ένα συγκεκριμένο φθορίζον χρώμα. Πρέπει να χρησιμοποιούνται δύο τύποι φίλτρων σε συνδυασμό.
