Η ειδική δομή ενός μικροσκοπίου φθορισμού περιλαμβάνει:
(I) Σύστημα φίλτρου χρώματος
Το έγχρωμο φίλτρο είναι ένα σημαντικό μέρος του μικροσκοπίου φθορισμού, τα βασικά συστατικά του από το φίλτρο φωτός διέγερσης (πρώτο φίλτρο φραγμού), το φίλτρο φωτός εκπομπής (δεύτερο φίλτρο φραγμού) και τη σύνθεση ημιδιαφανές και μισό αντιφίλτρο (καθρέπτης διαχωρισμού δέσμης). . Διάφοροι κατασκευαστές μοντέλων φίλτρων χρώματος, το όνομα συχνά δεν είναι ομοιόμορφο.
1. Φίλτρο φωτός διέγερσης και φίλτρο φωτός εκπομπής: σύμφωνα με την πηγή φωτός και τα χαρακτηριστικά του φθορισμού, συνήθως επιλέγετε τους ακόλουθους τρεις τύπους αντιστοίχισης, για να παράσχετε ένα συγκεκριμένο εύρος μήκους κύματος του φωτός διέγερσης και να κάνετε τη διέγερση του δείγματος του φθορισμού μέσω το προσοφθάλμιο στην απεικόνιση.
Διέγερση UV: Το φίλτρο φωτός διέγερσης επιτρέπει τη μετάδοση του φωτός UV και εμποδίζει τη διέλευση του ορατού φωτός πάνω από 400nm. Το αντίστοιχο φίλτρο εκπομπής επιτρέπει τη διέλευση του μπλε φωτός, το οποίο εμφανίζεται μπλε στο οπτικό πεδίο, π.χ. για χρώση DAPI.
Διέγερση μπλε φωτός: Το φίλτρο φωτός διέγερσης επιτρέπει στο μπλε φως να περάσει, εμποδίζοντας άλλα μήκη κύματος φωτός. Το αντίστοιχο φίλτρο εκπομπής επιτρέπει τη διέλευση του πράσινου φωτός, π.χ. για δείκτες χρώσης GFP.
Πράσινη διέγερση: Το φίλτρο διέγερσης επιτρέπει στο πράσινο φως να περάσει μέσα, εμποδίζοντας άλλα μήκη κύματος. Το αντίστοιχο φίλτρο εκπομπών επιτρέπει συνήθως να περάσει κόκκινο φως, π.χ. χρώση ροδαμίνης.
2. Ημιδιαφανές και ημι-ανακλαστικό φίλτρο: ο ρόλος του είναι να εμποδίζει εντελώς τη διέγερση του φωτός μέσω της ανάκλασης. και μέσω της αντίστοιχης περιοχής μήκους κύματος του εκπεμπόμενου φωτός. Το μοντέλο του και η διέγερση των φίλτρων φωτός και η εκπομπή των φίλτρων φωτός αντιστοιχούν.
(Β) αντικειμενικός φακός και προσοφθάλμιος φακός
Μπορεί να εφαρμοστεί μια ποικιλία αντικειμενικών φακών, αλλά * καλή επιλογή συμμετρικού, αχρωματικού αντικειμενικού φακού, λόγω του πολύ μικρού αυτοφθορισμού του και των ιδιοτήτων μετάδοσης φωτός (εύρος μήκους κύματος) κατάλληλο για φθορισμό. Καθώς η φωτεινότητα φθορισμού της εικόνας στο οπτικό πεδίο του μικροσκοπίου είναι ανάλογη με το τετράγωνο του ρυθμού στομίου του αντικειμενικού και αντιστρόφως ανάλογη με τη μεγέθυνσή του, έτσι ώστε να βελτιωθεί η φωτεινότητα της εικόνας φθορισμού, ο αντικειμενικός στόχος με μεγάλο ρυθμό στομίου θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί. Ειδικά για το φθορισμό δεν είναι αρκετά ισχυρό δείγματα, θα πρέπει να χρησιμοποιούν ένα μεγάλο ποσοστό στόμα, υψηλή αντικειμενική μετάδοση φωτός, με όσο το δυνατόν χαμηλότερο με τον προσοφθάλμιο φακό.
(Γ) άλλες οπτικές συσκευές
Ανακλαστήρας, το ανακλαστικό στρώμα του είναι γενικά επικαλυμμένο με αλουμίνιο, επειδή το αλουμίνιο στην υπεριώδη και το ορατό φως απορρόφηση του μπλε-ιώδους περιοχής λιγότερο, αντανακλώντας έως και 90% ή περισσότερο (ενώ η ανακλαστικότητα του αργύρου είναι μόνο 70%). Γενικά χρησιμοποιούνται επίπεδοι ανακλαστήρες. Κάτοπτρο Spotlight, σχεδιασμένο και κατασκευασμένο ειδικά για μικροσκοπία φθορισμού Καθρέφτης σποτ από γυαλί χαλαζία ή άλλο διαφανές γυαλί UV. Συσκευή πτώσης φωτός, η οποία εκτός από τη λειτουργία της πηγής μεταδιδόμενου φωτός, είναι πιο κατάλληλη για αδιαφανή και ημιδιαφανή δείγματα, όπως παχύ φιλμ, μεμβράνη φίλτρου, αποικία, καλλιέργεια ιστού και άλλα δείγματα για άμεση παρατήρηση. Τα τελευταία χρόνια, η ανάπτυξη ενός νέου τύπου μικροσκοπίου φθορισμού χρησιμοποιώντας συσκευή πτώσης φωτός, που ονομάζεται μικροσκόπιο φθορισμού πτώσης.
(Δ) πηγή φωτός
Σήμερα, ως πηγή φωτός χρησιμοποιείται λαμπτήρας υδραργύρου υψηλής πίεσης 50 ή 100 W. Η εργασία από την εκκένωση των δύο ηλεκτροδίων, που προκαλείται από την εξάτμιση υδραργύρου, η σφαίρα της πίεσης του αέρα ανεβαίνει γρήγορα (αυτή η διαδικασία διαρκεί γενικά περίπου 5 ~ 15 λεπτά) και στη διαδικασία εκπομπής κβαντών φωτός, το μήκος κύματος του απελευθερωμένου φωτός είναι αρκετό για να διεγείρει Όλοι οι τύποι φθοριζουσών ουσιών, επομένως, για το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιείται συνήθως.
Οι λαμπτήρες υδραργύρου έχουν σχετικά μικρή διάρκεια ζωής, συνήθως 200 ώρες, και ως απάντηση σε αυτόν τον περιορισμό ζωής, τα τελευταία χρόνια, μια νέα πηγή φωτός φθορισμού, η X-Cite, έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως για τη μεγάλη διάρκεια ζωής της λάμπας των 2000 ωρών και την ευέλικτη χρήση της. - δεν απαιτείται προθέρμανση και είναι έτοιμο για χρήση αμέσως από το κουτί.
