Επέκταση των πλεονεκτημάτων της μικροσκοπίας Multiphoton Laser Scanning για να συμπεριληφθεί
Το μικροσκόπιο πολλαπλών σάρωσης σάρωσης με λέιζερ είναι μια σημαντική βελτίωση της οπτικής μικροσκοπίας, που εκδηλώνεται κυρίως στην ικανότητα να παρατηρείται βαθιές δομές ζωντανών κυττάρων, σταθερών κυττάρων και ιστών και να επιτυγχάνονται σαφείς και αιχμηρές δομές πολλαπλών επιπέδων z-plane, δηλαδή οπτικές φέτες, οι οποίες μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την κατασκευή τρισδιάστατων στερεών δομών των ειδών. Το ομοεστιακό μικροσκόπιο χρησιμοποιεί μια πηγή φωτός λέιζερ, η οποία επεκτείνεται για να γεμίσει ολόκληρο το εστιακό επίπεδο του αντικειμενικού φακού και στη συνέχεια συγκλίνει σε πολύ μικρά σημεία στο εστιακό επίπεδο του δείγματος μέσω του συστήματος φακού του αντικειμενικού φακού. Σύμφωνα με το αριθμητικό άνοιγμα του αντικειμενικού φακού, η διάμετρος του φωτεινού σημείου φωτισμού είναι περίπου 0 25-0. Το μέγεθος του ομοεστιακού σημείου καθορίζεται από το σχεδιασμό μικροσκοπίου, το μήκος κύματος λέιζερ, τα αντικειμενικά χαρακτηριστικά, τις ρυθμίσεις κατάστασης μονάδας σάρωσης και τις ιδιότητες δείγματος. Το εύρος φωτισμού και το βάθος ενός μικροσκοπίου πεδίου είναι μεγάλα, ενώ ο φωτισμός ενός ομοεστιακού μικροσκοπίου επικεντρώνεται σε ένα εστιακό σημείο στο εστιακό επίπεδο. Το βασικό πλεονέκτημα της ομοεστιακής μικροσκοπίας είναι ότι μπορεί να εκτελέσει λεπτή οπτική τομή σε παχιά φθορίζοντα δείγματα (έως 5 {{10} μm ή περισσότερο), με πάχος περίπου 0,5 έως 1,5 μm. Η σειρά των εικόνων οπτικών φέτας μπορεί να ληφθεί με τη μετακίνηση του δείγματος προς τα πάνω και προς τα κάτω χρησιμοποιώντας τον βηματικό κινητήρα του άξονα z του μικροσκοπίου. Η συλλογή πληροφοριών εικόνας ελέγχεται μέσα στο επίπεδο * *, χωρίς παρεμβολές από σήματα που εκπέμπονται από άλλες θέσεις στο δείγμα. Μετά την αφαίρεση της επίδρασης του φθορισμού του υποβάθρου και την αύξηση της αναλογίας σήματος προς θόρυβο, η αντίθεση και η ανάλυση των ομοεστιακών εικόνων βελτιώνονται σημαντικά σε σύγκριση με τις παραδοσιακές εικόνες φθορισμού φωτισμού πεδίου. Σε πολλά δείγματα, τα περίπλοκα δομικά συστατικά αλληλοσυμπληρώνονται για να σχηματίσουν σύνθετα συστήματα, αλλά όταν μπορούν να συλλεχθούν αρκετά οπτικά τμήματα, μπορούμε να χρησιμοποιήσουμε το λογισμικό για να τα ανακατασκευάσουμε σε τρεις διαστάσεις. Αυτή η πειραματική μέθοδος έχει χρησιμοποιηθεί ευρέως στη βιολογική έρευνα για να διασαφηνίσει τις σύνθετες δομικές και λειτουργικές σχέσεις μεταξύ κυττάρων ή ιστών.
