Προετοιμασία και παρατήρηση βιολογικών δειγμάτων για ηλεκτρονική μικροσκοπία
Η ανάλυση του μικροσκοπίου εξαρτάται από το μήκος κύματος του φωτός που χρησιμοποιείται, το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο άρχισε να εμφανίζεται το 1933 οφείλεται στη χρήση πολύ μικρότερου μήκους κύματος από το ορατό φως της δέσμης ηλεκτρονίων ως πηγή φωτός, έτσι ώστε η ανάλυση να μπορεί να επιτύχει από ό, τι το οπτικό μικροσκόπιο βελτιώθηκε σημαντικά. Η διαφορετική πηγή φωτός καθορίζει επίσης μια σειρά διαφορών μεταξύ του ηλεκτρονικού μικροσκοπίου και του οπτικού μικροσκοπίου.
Σύμφωνα με τις διαφορές στην αρχή απεικόνισης της δέσμης ηλεκτρονίων και το ρόλο του δείγματος στους διαφορετικούς τρόπους, το σύγχρονο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο έχει αναπτυχθεί για να σχηματίσει έναν αριθμό τύπων, προς το παρόν * που συνήθως χρησιμοποιούνται είναι το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης και το ηλεκτρόνιο σάρωσης μικροσκόπιο, το πρώτο μπορεί να είναι στο εύρος 1,000-1,000,000 φορές η συνολική μεγέθυνση του εύρους αλλαγών, το δεύτερο μπορεί να είναι στη συνολική μεγέθυνση του { {4}},000 φορές τη συνολική μεγέθυνση των αλλαγών μεταξύ. Αυτό το πείραμα επικεντρώνεται στην προετοιμασία δειγμάτων για τους δύο τύπους μικροσκοπίων, το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης και το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης.
Υλικά
1. Στέλεχος Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) λοξή.
2. Διαλύματα ή αντιδραστήρια Οξεικός αμυλεστέρας, πυκνό θειικό οξύ, άνυδρη αιθανόλη, αποστειρωμένο νερό, 2% φωσφοβολφραμικό οξύ νατρίου (pH 6.5-8.0) υδατικό διάλυμα, 0.3%. διάλυμα πολυβινυλοφορμαλδεΰδης (διαλυμένο σε τριχλωρομεθάνιο), κυτόχρωμα c, οξικό αμμώνιο, πλασμίδιο pBR322.
3. Όργανα ή άλλα σύνεργα Συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο, χάλκινο πλέγμα, χοάνη πορσελάνης, ποτήρι ζέσεως, επίπεδο πιάτο, αποστειρωμένη προχοΐδα, αποστειρωμένη λαβίδα, νυστέρι, διαφάνειες, ** πλάκα μέτρησης, συσκευή επικάλυψης κενού, στεγνωτήριο κρίσιμου σημείου και ούτω καθεξής.
Βήματα λειτουργίας
(Ι) Προετοιμασία δείγματος και παρατήρηση ηλεκτρονικής μικροσκοπίας μετάδοσης
1. Επεξεργασία μεταλλικού πλέγματος
Τα δείγματα για οπτική μικροσκοπία τοποθετούνται σε διαφάνειες για παρατήρηση. Ωστόσο, στην ηλεκτρονική μικροσκοπία μετάδοσης, δεδομένου ότι τα ηλεκτρόνια δεν μπορούν να διεισδύσουν στο γυάλινο φύλλο, μόνο υλικό πλέγματος μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως φορέας, που συνήθως ονομάζεται φέρον πλέγμα. Το πλέγμα μεταφοράς μπορεί να χωριστεί σε πολλές διαφορετικές προδιαγραφές λόγω διαφορετικών υλικών και σχημάτων, εκ των οποίων το * που χρησιμοποιείται συνήθως είναι το χάλκινο πλέγμα 200-400 (αριθμός οπών). Το χάλκινο πλέγμα πρέπει να υποβληθεί σε επεξεργασία πριν από τη χρήση για να αφαιρεθεί η βρωμιά πάνω του και να διατηρηθεί καθαρό, διαφορετικά θα επηρεάσει την ποιότητα του φιλμ στήριξης και τη διαύγεια των φωτογραφιών του δείγματος. Το πλέγμα χαλκού που χρησιμοποιήθηκε σε αυτό το πείραμα είναι 400 mesh, το οποίο μπορεί να αντιμετωπιστεί με τον ακόλουθο τρόπο: πρώτα, λευκάνετε το με οξικό αμυλεστέρα για μερικές ώρες, στη συνέχεια ξεπλύνετε με απεσταγμένο νερό για αρκετές φορές και στη συνέχεια λευκάνετε το σε άνυδρη αιθανόλη για αφυδάτωση. Εάν το πλέγμα χαλκού με την παραπάνω μέθοδο δεν είναι ακόμα καθαρό, μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την αραίωση πυκνού θειικού οξέος (1:1) βυθισμένο σε 1 ~ 2 λεπτά ή σε διάλυμα NaOH 1% βρασμένο για αρκετά λεπτά, ξεπλυμένο αρκετές φορές με απεσταγμένο νερό , τοποθετείται σε αφυδάτωση άνυδρης αιθανόλης, για χρήση.
2. Προετοιμασία μεμβράνης στήριξης
Στην παρατήρηση δειγμάτων, στο φέρον δίκτυο θα πρέπει επίσης να καλύπτεται με ένα στρώμα αδόμητης, ομοιόμορφης μεμβράνης, διαφορετικά μικρά δείγματα θα διαρρεύσουν από τις οπές στο δίκτυο μεταφοράς, αυτό το στρώμα φιλμ συνήθως ονομάζεται φιλμ υποστήριξης ή φιλμ φορέα. Το φιλμ στήριξης πρέπει να είναι διαφανές στα ηλεκτρόνια και το πάχος του πρέπει γενικά να είναι μικρότερο από 20 nm. κάτω από την πρόσκρουση της δέσμης ηλεκτρονίων, το φιλμ πρέπει επίσης να έχει έναν ορισμένο βαθμό μηχανικής αντοχής, να μπορεί να διατηρήσει τη σταθερότητα της δομής και να έχει καλή θερμική αγωγιμότητα. Επιπλέον, το δίκτυο υποστήριξης δεν πρέπει να έχει ορατή δομή κάτω από το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο και δεν έχει χημική αντίδραση με το δείγμα που μεταφέρεται και δεν παρεμβαίνει στην παρατήρηση του δείγματος και το πάχος του είναι γενικά περίπου 15 nm. Η μεμβράνη στήριξης μπορεί να είναι κατασκευασμένη από πλαστική μεμβράνη (π.χ. φιλμ βαμβακιού φωτιάς, φιλμ πολυαιθυλενικής φορμαλδεΰδης κ.λπ.), μεμβράνη άνθρακα ή μεταλλική μεμβράνη (π.χ. φιλμ βηρυλλίου κ.λπ.). Υπό συνήθεις συνθήκες εργασίας, οι απαιτήσεις μπορούν να ικανοποιηθούν με πλαστική μεμβράνη, ενώ η προετοιμασία της πλαστικής μεμβράνης στην αυτοκόλλητη μεμβράνη από βαμβάκι είναι σχετικά εύκολη, αλλά η αντοχή δεν είναι τόσο ισχυρή όσο η μεμβράνη φορμαλδεΰδης πολυαιθυλενίου.
