Διαφορές και χαρακτηριστικά μικροσκοπίου φθορισμού και συνηθισμένου οπτικού μικροσκοπίου
Το μικροσκόπιο φθορισμού και το συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο είναι διαφορετικό, δεν είναι μέσω του φωτισμού της συνηθισμένης πηγής φωτός για την παρατήρηση του δείγματος, αλλά η χρήση ενός συγκεκριμένου μήκους κύματος φωτός (συνήθως υπεριώδες, μπλε-ιώδες φως) διέγερσης φθορίζοντος υλικού εντός του δείγματος κάτω από το μικροσκόπιο, έτσι ώστε ο φθορισμός της πηγής φωτός μικροσκοπίου φθορισμού να μην παίζει έναν άμεσο φωτισμό, αλλά ως ένα είδος διέγερσης φθορίζοντος υλικού εντός του δείγματος της πηγής ενέργειας. Ο λόγος για τον οποίο μπορούμε να παρατηρήσουμε το δείγμα δεν οφείλεται στον φωτισμό της πηγής φωτός, αλλά στο φαινόμενο φθορισμού που παρουσιάζεται από το φθορίζον υλικό στο δείγμα μετά την απορρόφηση της φωτεινής ενέργειας της διέγερσης. Μπορεί να φανεί ότι τα χαρακτηριστικά του μικροσκοπίου φθορισμού, κυρίως η πηγή φωτός του, μπορεί να παρέχει μεγάλο αριθμό ειδικού μήκους κύματος του φωτός διέγερσης, έτσι ώστε το φθορίζον υλικό εντός του εξεταζόμενου δείγματος να αποκτήσει την απαραίτητη ένταση του φωτός διέγερσης. Ταυτόχρονα, το μικροσκόπιο φθορισμού πρέπει να διαθέτει αντίστοιχο σύστημα φίλτρου. Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι το βασικό εργαλείο για την ιστοχημεία φθορισμού. Αποτελείται από πηγή φωτός εξαιρετικά υψηλής πίεσης, σύστημα φίλτρου (συμπεριλαμβανομένης της πλάκας φίλτρου διέγερσης και καταστολής), οπτικό σύστημα και φωτογραφικό σύστημα και άλλα κύρια στοιχεία, είναι η χρήση ενός συγκεκριμένου μήκους κύματος φωτός για την τόνωση του δείγματος να εκπέμπει φθορισμό.
1. ο τρόπος διέγερσης φθορισμού: σύμφωνα με το εύρος μήκους κύματος του φωτός χωρίζεται σε μέθοδο διέγερσης UV (χρησιμοποιώντας υπεριώδες φωτισμό) και μέθοδο διέγερσης BV (χρησιμοποιώντας μπλε ιώδες φως) δύο είδη μεθόδου διέγερσης UV είναι μικρότερη από 400nm κοντά στο υπεριώδες φως για διέγερση. Δεν υπάρχει ορατό φως διέγερσης σε αυτή τη μέθοδο, επομένως ο παρατηρούμενος φθορισμός δείχνει τον εγγενή φθορισμό της χρωστικής και είναι εύκολο να διακριθεί ο ειδικός φθορισμός στο δείγμα από τον αυτοφθορισμό του ιστού υποβάθρου.
2. Μέθοδος διέγερσης BV: Η μέθοδος επικεντρώνεται στα 404nm, 434nm από το υπεριώδες σε μπλε φως για διέγερση. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί μπλε φως για να ακτινοβολήσει το δείγμα, επομένως το φίλτρο αποκοπής του συστήματος παρατήρησης φθορισμού πρέπει να χρησιμοποιεί ένα φίλτρο που μπορεί να εμποδίσει πλήρως το μπλε φως και να περάσει επαρκώς τον επιθυμητό πράσινο και κίτρινο φθορισμό. Φθορίζουσες χρωστικές για τη μέθοδο αντισωμάτων φθορισμού. Δεδομένου ότι το μήκος κύματος της μέγιστης απορρόφησης του φωτός διέγερσης και το μήκος κύματος της μέγιστης εκπομπής του φθορισμού είναι κοντά μεταξύ τους, τα φίλτρα που χρησιμοποιούνται στη μέθοδο διέγερσης BV πρέπει να είναι αιχμηρά φίλτρα αποκοπής. Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί το μπλε φως ως φως διέγερσης, επομένως η αποτελεσματικότητα απορρόφησης του φθοριούχου χρωμίου είναι υψηλότερη και μπορεί να ληφθεί πιο φωτεινή εικόνα. Το μειονέκτημα είναι ότι ο φθορισμός κάτω από 500 nm δεν είναι ορατός και πάνω από 500 nm ολόκληρη η εικόνα φαίνεται κίτρινη. Στη μέθοδο φθορίζοντος αντισώματος, το μεγαλύτερο μέρος της εξειδίκευσης κρίνεται από το μοναδικό χρώμα του φθοροχρωμίου, επομένως τα μειονεκτήματα της μεθόδου διέγερσης BV που περιγράφεται παραπάνω τείνουν να είναι εξαιρετικά επιδραστικά όταν συζητείται η λεπτή εξειδίκευση.
