Προετοιμασία βιολογικού δείγματος και παρατήρηση με χρήση ηλεκτρονικών μικροσκοπίων
Η ανάλυση ενός μικροσκοπίου εξαρτάται από το μήκος κύματος του φωτός που χρησιμοποιείται. Το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, που εμφανίστηκε το 1933, χρησιμοποιεί δέσμες ηλεκτρονίων με πολύ μικρότερο μήκος κύματος από το ορατό φως ως πηγή φωτός. Αυτό βελτιώνει σημαντικά την ανάλυσή του σε σύγκριση με τα οπτικά μικροσκόπια. Οι διαφορές στις πηγές φωτός οδηγούν επίσης σε μια σειρά από διακρίσεις μεταξύ ηλεκτρονικών μικροσκοπίων και οπτικών μικροσκοπίων.
Με βάση τις διαφορές στις αρχές απεικόνισης της δέσμης ηλεκτρονίων και στους τρόπους αλληλεπίδρασης της δέσμης με τα δείγματα, τα σύγχρονα ηλεκτρονικά μικροσκόπια έχουν εξελιχθεί σε πολλούς τύπους. Τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα είναι τα ηλεκτρονικά μικροσκόπια μετάδοσης (TEM) και τα ηλεκτρονικά μικροσκόπια σάρωσης (SEM). Η συνολική μεγέθυνση του TEM μπορεί να κυμαίνεται από 1000 έως 1.000.000 φορές, ενώ του SEM κυμαίνεται από 20 έως 300.000 φορές. Αυτό το πείραμα εισάγει κυρίως την προετοιμασία δειγμάτων για ηλεκτρονικά μικροσκόπια μετάδοσης και ηλεκτρονικά μικροσκόπια σάρωσης.
II. Συσκευές και Υλικά
Ενταση:Escherichia coliλοξή κουλτούρα
Διαλύματα και αντιδραστήρια: Formvar, πυκνό θειικό οξύ, απόλυτη αιθανόλη, στείρο νερό, 2% υδατικό διάλυμα φωσφοβολφραμικού νατρίου (pH 6,5–8,0), φορμικό διάλυμα πολυβινυλίου 0,3% (διαλυμένο σε χλωροφόρμιο), κυτόχρωμα C, 2.BR3 ακετικό αμμώνιο, pH2.BR3 ακετικό αμμώνιο.
Όργανα και προμήθειες: Συμβατικό οπτικό μικροσκόπιο, χάλκινα πλέγματα, χωνί Buchner, ποτήρι ζέσεως, τρυβλίο Petri, αποστειρωμένο σταγονόμετρο, αποστειρωμένη λαβίδα, βελόνα ανατομής, γυάλινη πλάκα, αιμοκυτταρόμετρο, εξατμιστής κενού, στεγνωτήρας κρίσιμου σημείου κ.λπ.
III. Λειτουργικές Διαδικασίες
(1) Προετοιμασία δείγματος και παρατήρηση για Ηλεκτρονική Μικροσκοπία Μετάδοσης
Επεξεργασία μεταλλικών πλεγμάτων Δείγματα για οπτική μικροσκοπία παρατηρούνται σε γυάλινες πλάκες. Ωστόσο, για το ηλεκτρονικό μικροσκόπιο μετάδοσης, τα ηλεκτρόνια δεν μπορούν να διαπεράσουν το γυαλί, επομένως χρησιμοποιούνται υποστρώματα πλέγματος, κοινώς γνωστά ως πλέγματα δειγμάτων. Τα πλέγματα δειγμάτων διατίθενται σε διάφορες προδιαγραφές ανάλογα με το υλικό και το σχήμα. Τα χάλκινα πλέγματα των 200–400 mesh είναι τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα. Τα χάλκινα πλέγματα πρέπει να καθαρίζονται πριν από τη χρήση για την απομάκρυνση των ρύπων, διαφορετικά θα επηρεαστεί η ποιότητα των φιλμ στήριξης και η διαύγεια των μικρογραφιών του δείγματος. Αυτό το πείραμα υιοθετεί πλέγματα χαλκού 400 mesh, τα οποία αντιμετωπίζονται ως εξής: πρώτα εμποτίστε σε διάλυμα Formvar για αρκετές ώρες, ξεπλύνετε επανειλημμένα με απεσταγμένο νερό και μετά αφυδατώστε με εμβάπτιση σε απόλυτη αιθανόλη. Εάν τα πλέγματα παραμένουν βρώμικα μετά τα παραπάνω βήματα, μουλιάστε τα σε αραιωμένο πυκνό θειικό οξύ (1:1) για 1–2 λεπτά ή βράστε τα σε διάλυμα NaOH 1% για αρκετά λεπτά. Ξεπλύνετε καλά με απεσταγμένο νερό, αφυδατώστε με απόλυτη αιθανόλη και αφήστε στην άκρη για μελλοντική χρήση.
