Τεχνικές παράμετροι μικροσκοπίας φθορισμού Τεχνικές και μέθοδοι μικροσκοπίας φθορισμού
Τεχνικές παράμετροι μικροσκοπίου φθορισμού 1. Προσοφθάλμιο ευρυγώνιο 2. Αχρωμικός αντικειμενικός φακός 3. Μετατροπέας αντικειμενικού φακού τεσσάρων οπών 4. Συσκευή επιφθορισμού Μπλε (Β) Πράσινο (G) σύστημα διέγερσης 10Λαμπτήρας υδραργύρου 0W 5. Ομοαξονικός μηχανισμός ρύθμισης χονδρικής και λεπτής εστίασης: προσαρμογή Εύρος εστίασης: 15 mm Τιμή πλέγματος μικροκίνησης: 0,002 mm 6. Μηχανικό τραπέζι διπλής στρώσης Εύρος διαμήκους κίνησης: 70 mm Εύρος πλευρικής κίνησης: 50 mm
Τεχνικές παράμετροι μικροσκοπίου φθορισμού
1. Ευρυγώνιο προσοφθάλμιο
2. Αχρωματικός αντικειμενικός φακός
3. Ρύγχος τεσσάρων ανοιγμάτων
4. Συσκευή επιφθορισμού μπλε (B) πράσινο (G) σύστημα διέγερσης λάμπα υδραργύρου 100W
5. Ομοαξονικός μηχανισμός ρύθμισης χονδροειδούς και λεπτής εστίασης: εύρος εστίασης 15 mm τιμή πλέγματος λεπτής κίνησης 0.002 mm
6. Μηχανικός πάγκος εργασίας διπλής στρώσης
Εύρος κάθετης κίνησης: 70 mm Εύρος πλευρικής κίνησης: 50 mm
Δεξιότητες και μέθοδοι μικροσκοπίας φθορισμού
(1) Γυάλινη τσουλήθρα
Το πάχος της γυάλινης διαφάνειας πρέπει να είναι μεταξύ 0,8 και 1,2 mm. Μια διαφάνεια που είναι πολύ παχιά θα απορροφήσει περισσότερο φως αφενός και, αφετέρου, το φως διέγερσης δεν μπορεί να συγκεντρωθεί στο δείγμα. Οι πλάκες πρέπει να είναι λείες, ομοιόμορφες σε πάχος και απαλλαγμένες από εμφανή αυτοφθορισμό. Μερικές φορές χρησιμοποιούνται διαφάνειες από γυαλί χαλαζία.
(2) Γυαλί καλύμματος
Το πάχος του γυαλιού καλύμματος είναι περίπου 0.17 mm, λείο. Προκειμένου να ενισχυθεί το φως διέγερσης, μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ένα γυαλί κάλυψης παρεμβολής, το οποίο είναι ένα ειδικό γυαλί επικάλυψης επικαλυμμένο με πολλά στρώματα ουσιών (όπως το φθοριούχο μαγνήσιο) που έχουν διαφορετικές επιδράσεις παρεμβολής στο φως διαφορετικών μηκών κύματος, το οποίο μπορεί να κάνει ο φθορισμός πάει ομαλά. Το συναρπαστικό φως διέρχεται και ανακλάται, και αυτό το ανακλώμενο φως διέγερσης διεγείρει το δείγμα.
(3) Δείγμα
Οι φέτες ιστού ή άλλα δείγματα δεν πρέπει να είναι πολύ παχιά. Εάν είναι πολύ παχύ, το μεγαλύτερο μέρος του φωτός διέγερσης θα καταναλωθεί στο κάτω μέρος του δείγματος, ενώ το πάνω μέρος που παρατηρείται άμεσα από τον αντικειμενικό φακό δεν θα διεγείρεται πλήρως. Επιπλέον, η επικάλυψη κυττάρων ή η κάλυψη ακαθαρσιών, επηρεάζουν την κρίση.
(4) Στήριγμα
Η γλυκερίνη χρησιμοποιείται συνήθως ως μέσο στερέωσης, το οποίο δεν πρέπει να έχει αυτοφθορισμό, άχρωμο και διαφανές και η φωτεινότητα του φθορισμού είναι πιο φωτεινή σε pH 8.5-9.5 και δεν είναι εύκολο να εξασθενίσει γρήγορα. Ως εκ τούτου, ένα ίσο μείγμα γλυκερόλης και ρυθμιστικού διαλύματος ανθρακικού 0,5 mol/l με pH 9.0 έως 9,5 χρησιμοποιείται συνήθως ως παράγοντας στερέωσης.
(5) λάδι καθρέφτη
Γενικά, κατά την παρατήρηση δειγμάτων με μικροσκόπια φθορισμού σκοτεινού πεδίου και φακούς εμβάπτισης λαδιού, πρέπει να χρησιμοποιείται λάδι εμβάπτισης. Είναι καλύτερο να χρησιμοποιείτε ειδικό μη φθορίζον λάδι εμβάπτισης. Η παραπάνω γλυκερίνη μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί αντ 'αυτού και μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί υγρή παραφίνη, αλλά ο δείκτης διάθλασης είναι χαμηλός, γεγονός που επηρεάζει ελαφρά την ποιότητα της εικόνας. Επιρροή.
Η αρχή και τα δομικά χαρακτηριστικά του μικροσκοπίου φθορισμού
Το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιεί ένα σημείο με υψηλή φωτεινή απόδοση για να εκπέμπει φως συγκεκριμένου μήκους κύματος (όπως υπεριώδες φως 3650 in ή μωβ μπλε φως 4200 ίντσες) μέσω του συστήματος φίλτρου ως φως διέγερσης για να διεγείρει τις φθορίζουσες ουσίες στο δείγμα για να εκπέμπει φθορισμό διάφορα χρώματα Μετά από αυτό, παρατηρήστε μέσω της μεγέθυνσης του αντικειμενικού φακού και του προσοφθάλμιου φακού. Με αυτόν τον τρόπο, κάτω από ένα φόντο έντονης αντίθεσης, ακόμα κι αν ο φθορισμός είναι πολύ ασθενής, είναι εύκολο να αναγνωριστεί και έχει υψηλή ευαισθησία. Χρησιμοποιείται κυρίως για την έρευνα της κυτταρικής δομής και λειτουργίας και της χημικής σύνθεσης. Η βασική δομή ενός μικροσκοπίου φθορισμού αποτελείται από ένα συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο συν μερικά αξεσουάρ (όπως μια πηγή φωτός φθορισμού, ένα φίλτρο διέγερσης, έναν διαχωριστή δέσμης δύο χρωμάτων και ένα φίλτρο μπλοκαρίσματος κ.λπ.). Πηγή φωτός φθορισμού—γενικά χρησιμοποιείται λάμπα υδραργύρου εξαιρετικά υψηλής πίεσης (50-200W), η οποία μπορεί να εκπέμπει φως διαφόρων μηκών κύματος, αλλά κάθε φθορίζουσα ουσία έχει ένα μήκος κύματος διέγερσης που παράγει τον ισχυρότερο φθορισμό, επομένως ένα φίλτρο διέγερσης (Γενικά, υπάρχουν φίλτρα διέγερσης υπεριώδους, μωβ, μπλε και πράσινου), τα οποία επιτρέπουν μόνο στο φως διέγερσης συγκεκριμένου μήκους κύματος να περάσει και να ακτινοβολήσει το δείγμα, ενώ απορροφά άλλο φως. Αφού κάθε ουσία ακτινοβοληθεί από το φως διέγερσης, εκπέμπει ορατό φθορισμό με μεγαλύτερο μήκος κύματος από το μήκος κύματος της ακτινοβολίας σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα. Ο φθορισμός είναι συγκεκριμένος και γενικά ασθενέστερος από το φως διέγερσης. Προκειμένου να παρατηρηθεί συγκεκριμένος φθορισμός, πρέπει να προστεθεί μπλοκάρισμα (ή καταστολή) πίσω από τον αντικειμενικό φακό και να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με αυτόν.
Η διαφορά μεταξύ μικροσκοπίου φθορισμού και συνηθισμένου μικροσκοπίου
1. Η μέθοδος φωτισμού είναι συνήθως επισκοπική, δηλαδή η φωτεινή πηγή προβάλλεται στο δείγμα μέσω του αντικειμενικού φακού.
2. Η πηγή φωτός είναι το υπεριώδες φως, το μήκος κύματος είναι μικρότερο και η ανάλυση είναι υψηλότερη από αυτή των συνηθισμένων μικροσκοπίων.
3. Υπάρχουν δύο ειδικά φίλτρα, το ένα μπροστά από την πηγή φωτός χρησιμοποιείται για να φιλτράρει το ορατό φως και αυτό που βρίσκεται ανάμεσα στον προσοφθάλμιο και τον αντικειμενικό φακό χρησιμοποιείται για να φιλτράρει τις υπεριώδεις ακτίνες για την προστασία του ανθρώπινου ματιού.
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι επίσης ένα είδος οπτικού μικροσκοπίου, η κύρια διαφορά είναι ότι το μήκος κύματος διέγερσης των δύο είναι διαφορετικό. Αυτό καθορίζει τη διαφορά μεταξύ του μικροσκοπίου φθορισμού και του συνηθισμένου οπτικού μικροσκοπίου όσον αφορά τη δομή και τη χρήση.
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι ένα απαραίτητο εργαλείο στην ανοσοφθορισμό κυτταροχημεία. Αποτελείται από κύρια εξαρτήματα όπως πηγή φωτός, σύστημα πλάκας φίλτρου και οπτικό σύστημα. Είναι να χρησιμοποιηθεί ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός για να διεγείρει το δείγμα ώστε να εκπέμπει φθορισμό και να παρατηρήσει την εικόνα φθορισμού του δείγματος ενισχύοντας τον αντικειμενικό φακό και το σύστημα προσοφθάλμιου φακού.
