Οδηγίες λειτουργίας και προφυλάξεις για μικροσκόπιο φθορισμού
Οι εικόνες φθορισμού που παρατηρούνται κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού διαθέτουν μορφολογικά χαρακτηριστικά καθώς και χρώμα και φωτεινότητα φθορισμού. Και οι δύο παράγοντες πρέπει να συνδυαστούν για ολοκληρωμένη αξιολόγηση των αποτελεσμάτων. Η καταγραφή των αποτελεσμάτων βασίζεται σε υποκειμενικούς δείκτες που βασίζονται στην οπτική παρατήρηση από τους χειριστές, η οποία είναι γενικά αξιόπιστη για τη συνήθη ποιοτική παρατήρηση. Με την πρόοδο της τεχνολογίας, αντικειμενικά όργανα όπως μικροφασματοφωτόμετρα και αναλυτές εικόνας χρησιμοποιούνται όλο και περισσότερο για τεκμηρίωση και αξιολόγηση. Ωστόσο, τα αποτελέσματα που προκύπτουν από αυτά τα μέσα εξακολουθούν να απαιτούν υποκειμενική ερμηνεία.
Η φωτογραφία με μικροσκόπιο φθορισμού είναι απαραίτητη για την τεκμηρίωση εικόνων φθορισμού. Επειδή ο φθορισμός εξασθενεί γρήγορα, τα αποτελέσματα πρέπει να φωτογραφηθούν αμέσως. Η διαδικασία είναι σε μεγάλο βαθμό η ίδια με τη συμβατική φωτομικρογραφία, με τη διαφορά ότι απαιτούνται φωτογραφικά φιλμ υψηλής ταχύτητας ASA 200 και άνω. Το υπεριώδες φως προκαλεί σοβαρή φωτολεύκανση φθορισμού. Για παράδειγμα, δείγματα με σήμανση FITC χάνουν το 50% της φωτεινότητας του φθορισμού τους μετά από 30 δευτερόλεπτα ακτινοβολίας UV. Επομένως, η αργή έκθεση δεν θα καταγράψει εικόνες φθορισμού. Τα περισσότερα μικροσκόπια φθορισμού ερευνητικής ποιότητας είναι εξοπλισμένα με ημιαυτόματα ή πλήρως αυτόματα συστήματα φωτομικρογραφίας.
Προφυλάξεις
① Λειτουργείτε αυστηρά σύμφωνα με το εγχειρίδιο του κατασκευαστή του μικροσκοπίου φθορισμού. μην τροποποιείτε αυθαίρετα τις διαδικασίες λειτουργίας. ② Οι παρατηρήσεις πρέπει να γίνονται σε σκοτεινό θάλαμο. Αφού μπείτε στο σκοτεινό θάλαμο, ενεργοποιήστε το ρεύμα και ανάψτε τη λάμπα υδραργύρου υψηλής πίεσης για 5–15 λεπτά. Ξεκινήστε την παρατήρηση δείγματος μόνο αφού σταθεροποιηθεί η πηγή φωτός και τα μάτια σας προσαρμοστούν πλήρως στο σκοτάδι.
③ Προστατέψτε τα μάτια σας από την υπεριώδη ακτινοβολία. Φοράτε προστατευτικά γυαλιά όταν ρυθμίζετε την πηγή φωτός.
④ Κάθε συνεδρία παρατήρησης συνιστάται να διαρκεί 1–2 ώρες. Η φωτεινή ένταση της λάμπας υδραργύρου εξαιρετικά υψηλής πίεσης μειώνεται σταδιακά μετά από 90 λεπτά και ο φθορισμός εξασθενεί ανάλογα. Ο φθορισμός των δειγμάτων εξασθενεί επίσης αισθητά μετά από 3-5 λεπτά έκθεσης στην υπεριώδη ακτινοβολία. Ο μέγιστος χρόνος συνεχούς παρατήρησης δεν πρέπει να υπερβαίνει τις 2–3 ώρες.
⑤ Η διάρκεια ζωής της φωτεινής πηγής μικροσκοπίου φθορισμού είναι περιορισμένη. Εξετάστε τα δείγματα σε παρτίδες για να εξοικονομήσετε χρόνο και να παρατείνετε τη διάρκεια ζωής του λαμπτήρα. Χρησιμοποιήστε ηλεκτρικό ανεμιστήρα για απαγωγή θερμότητας σε ζεστά περιβάλλοντα. Καταγράψτε το χρόνο λειτουργίας από την αρχή μετά την αντικατάσταση του λαμπτήρα. Εάν η λάμπα σβήσει, περιμένετε μέχρι να κρυώσει τελείως πριν την ανάψει ξανά. Αποφύγετε τη συχνή επανεκκίνηση της λάμπας.
⑥ Παρατηρήστε τα χρωματισμένα δείγματα αμέσως μετά τη χρώση, καθώς ο φθορισμός θα εξασθενίσει με την πάροδο του χρόνου. Τα δείγματα μπορούν να αποθηκευτούν στους 4 βαθμούς σε πλαστικές σακούλες από πολυαιθυλένιο για να επιβραδυνθεί η αποσύνθεση του φθορισμού και να αποτραπεί η εξάτμιση του μέσου στερέωσης.
⑦ Πρότυπο βαθμολόγησης για την ένταση φθορισμού: υιοθετούνται γενικά τέσσερις βαθμοί: "−": Χωρίς φθορισμό ή ανιχνεύσιμο μόνο αχνό φθορισμό "+": Ελάχιστα ανιχνεύσιμο αλλά σαφές σήμα φθορισμού "++": Φωτεινός ορατός φθορισμός
