Η αρχή και τα δομικά χαρακτηριστικά της μικροσκοπίας φθορισμού
Το μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιεί ένα σημείο με υψηλή φωτεινή απόδοση για να εκπέμπει ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός (όπως υπεριώδες φως 3650 in ή ιώδες μπλε φως 4200 ίντσες) μέσω ενός συστήματος έγχρωμου φιλτραρίσματος ως φως διέγερσης και διεγείρει τις φθορίζουσες ουσίες στο δείγμα να εκπέμπουν διάφορες χρώματα του φθορισμού. Μετά από αυτό, παρατηρείται μέσω της μεγέθυνσης του αντικειμενικού φακού και του προσοφθάλμιου φακού. Με αυτόν τον τρόπο, είναι εύκολο να αναγνωριστεί ακόμα και όταν ο φθορισμός είναι πολύ ασθενής σε ένα ισχυρό φόντο, με υψηλή ευαισθησία. Χρησιμοποιείται κυρίως για τη μελέτη της κυτταρικής δομής και λειτουργίας, καθώς και για τη χημική σύνθεση. Η βασική δομή ενός μικροσκοπίου φθορισμού αποτελείται από ένα συνηθισμένο οπτικό μικροσκόπιο συν εξαρτήματα όπως μια πηγή φωτός φθορισμού, φίλτρο διέγερσης, διαχωριστήρα διχρωμίας δέσμης και φίλτρο μπλοκαρίσματος. Οι πηγές φωτός φθορισμού χρησιμοποιούν γενικά λαμπτήρες υδραργύρου εξαιρετικά υψηλής πίεσης (50-200W), οι οποίοι μπορούν να εκπέμπουν φως διαφόρων μηκών κύματος. Ωστόσο, κάθε φθορίζουσα ουσία έχει ένα μήκος κύματος φωτός διέγερσης που παράγει τον ισχυρότερο φθορισμό, επομένως πρέπει να προστεθούν φίλτρα διέγερσης (συνήθως φίλτρα διέγερσης υπεριώδους, μωβ, μπλε και πράσινου) για να επιτρέπεται μόνο σε ένα συγκεκριμένο μήκος κύματος φωτός διέγερσης να διεισδύσει και να ακτινοβολήσει το δείγμα, ενώ απορροφά όλο το άλλο φως. Αφού ακτινοβοληθεί από το φως διέγερσης, κάθε ουσία εκπέμπει ορατό φθορισμό μεγαλύτερο από το μήκος κύματος της ακτινοβολίας σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα. Ο φθορισμός έχει ειδικότητα και είναι γενικά πιο αδύναμος από το φως διέγερσης. Για να παρατηρήσετε συγκεκριμένο φθορισμό, είναι απαραίτητο να προσθέσετε μπλοκάρισμα (ή καταστολή) πίσω από τον αντικειμενικό φακό και να τον χρησιμοποιήσετε σε συνδυασμό.
Διαφορά μεταξύ μικροσκοπίου φθορισμού και συνηθισμένου μικροσκοπίου
1. Η μέθοδος φωτισμού είναι συνήθως τύπου πτώσης δέσμης, στην οποία η φωτεινή πηγή προβάλλεται στο δείγμα μέσω ενός αντικειμενικού φακού.
2.Η πηγή φωτός είναι το υπεριώδες φως, με μικρότερο μήκος κύματος και υψηλότερη ανάλυση από τα συνηθισμένα μικροσκόπια.
3.Υπάρχουν δύο ειδικά φίλτρα, το ένα μπροστά από την πηγή φωτός χρησιμοποιείται για να φιλτράρει το ορατό φως και αυτό που βρίσκεται ανάμεσα στον προσοφθάλμιο και τον αντικειμενικό φακό χρησιμοποιείται για να φιλτράρει τις υπεριώδεις ακτίνες για την προστασία του ανθρώπινου ματιού.
Η μικροσκοπία φθορισμού είναι επίσης ένας τύπος οπτικού μικροσκοπίου, με κύρια διαφορά τα διαφορετικά μήκη κύματος διέγερσης. Αυτό καθορίζει τις διαφορές στη δομή και τη χρήση μεταξύ της μικροσκοπίας φθορισμού και της συνηθισμένης οπτικής μικροσκοπίας.
Το μικροσκόπιο φθορισμού είναι ένα βασικό εργαλείο για την κυτταροχημεία του ανοσοφθορισμού. Αποτελείται από κύρια εξαρτήματα όπως μια πηγή φωτός, ένα σύστημα πλάκας φίλτρου και ένα οπτικό σύστημα. Χρησιμοποιεί ένα ορισμένο μήκος κύματος φωτός για να διεγείρει το δείγμα ώστε να εκπέμπει φθορισμό και το μεγεθύνει μέσω ενός αντικειμενικού φακού και ενός συστήματος προσοφθάλμιου φακού για να παρατηρήσει την εικόνα φθορισμού του δείγματος.
